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feiyang

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楼主

发表于 2011-1-24 07:17 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

请教大家！分离人骨髓MSC，用的Ficoll的密度是1.073g/ml还是1.077g/ml啊？分离单个核细胞层时，离心转速是多少？20min还是30min？

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deron

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沙发

发表于 2011-1-24 07:59 |只看该作者

俩密度差不多啊~
我们的是1.073，离心转速是2500r/min，20min，把起速和降速调到最低

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jinyiran

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藤椅

发表于 2011-1-24 08:17 |只看该作者

我们用的是1077。离心20min.

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lgh1986

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板凳

发表于 2011-1-24 08:55 |只看该作者

Ficoll分离人骨髓一般成倍稀释后2-3:1叠加到分离液上，保证界面清晰，2500转 20min，有一点要非常注意，这是我摸索了很长时间的宝贵经验，就是分离时离心机的升速和降速都要调到最低，也就是说离心机的旋转速度要缓升缓降，这样才能见到明显的白膜层，如果快升快降的话，只能见到一团雾状，分界不明显，吸取时容易吸取过多的分离液，对细胞生长不利。

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siyue13

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报纸

发表于 2011-1-24 11:14 |只看该作者

不懂，帮顶

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shiqingxi

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地板

发表于 2011-1-25 09:07 |只看该作者

我觉得多大的转速和时间是要看你离心机力臂的大小。还是算重力G比较准确，网上有公式可以搜一下，一般是377g

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tangyvhuang

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7楼

发表于 2011-1-25 22:08 |只看该作者

先把人骨髓对倍稀释一下之后，2倍量加到Ficoll分离液上，保证界面清晰，2500rpm 20min，这个时间和转速不太确定，根据离心机的半径以及新旧都有关系，我们一般是这个条件，小范围的调整一下，比如说2600，20或者是2500 ，25什么的只要是分层明显就好了，分离时离心机的升速和降速都要调到最低