Tomson实验室用OCT4, SOX2, NANOG, and LIN28四种转录因子得到ipsc的原文+简析

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Induced Pluripotent Stem Cell Lines Derived from Human Somatic Cells
: ^9 c: E5 J2 H) m        本文介绍了用OCT4, SOX2, NANOG, and LIN28四种转录因子诱导体细胞重编程的具体情况，文章种选用了 3种体细胞作为材料。2 F; x1 m. i7 N
         1、经过基因修饰的人ES细胞系的后代：筛选原理：内源性OCT4的表达是多能性细胞的一个检测标志，利用同源重组技术将OCT4基因导入人已分化的ES细胞系中，同时OCT4基因中也连有neomycin phosphotransferase（新霉素磷酸转移酶）基因，这种细胞系能够由于内源性OCT4的表达而启动neomycin phosphotransferase（新霉素磷酸转移酶）基因的表达，从而对遗传霉素产生抗性。通过慢病毒载体将OCT4, SOX2, NANOG, and LIN28整合到受体基因组中，将导致内源性OCT4的表达，从而用于筛选目的细胞。9 c. g9 p8 K$ r$ ^4 ^, d' V
          在14种备选因子种选出OCT4, SOX2, NANOG, and LIN28这四种因子在重编程方面有着重要意义，依次去掉一个因子份结果显示 OCT4 or SOX2 的去除将无法得到ipsc，NANOG 的表达将提高ipsc的得率，而 LIN28 对其得率的影响则相对较小。" |: {1 Y* ~; R% d2 [
         2、再研究一下这4中因子对首次重编程、没有基因修饰的二倍体人成纤维细胞是否有同样的作用。2 }7 ^4 u2 M- b9 f# p* ~
        选用IMR90（人胚肺成纤维细胞 ），因为其背景比较清晰。导入4种因子后，通过形态学观察（致密、高核质比、明显的核仁，诱导率0.022%）和在ES条件培养基中的优势生长也筛选出ES样细胞，而且核型正常，选用4个进一步增殖与分析，这4个均表达了端粒酶活性、表达了人ES细胞表面特异性抗原：SSEA-3, SSEA-4, Tra-1-60 and Tra-1-8，微阵列分析这4个ipsc的基因表达情况，与已知的人类的5个ES细胞系很相似，每一个ipsc中内源性的OCT4 and NANOG的表达水平与人的ESC相似，但外源性基因的表达在克隆与克隆、基因与基因间却是很有差异的。比如：外源性 OCT4的表达量挺高，但大部分ips克隆只表达很少的外源性的NANOG  0 R( Q/ k9 o% q
        OCT4 的甲基化水平：ES cells 与 IMR90 cells 的OCT4 甲基化水平有明显的差异，与iPS(IMR90)的甲基化水平则很相似。
4 F5 t% F7 ^+ S. t    同时也得到了拟胚体和畸胎瘤，这四种ips单克隆均可得到原始3胚层，证明了其具有分化潜能。$ L- R! D% v) y! Y7 y
         指纹分析结果表明得到的ips克隆来自于IMR90，而不是人的ES细胞系。
; f$ V; M$ m0 ^. D* q9 j3、用出生后胎儿的体细胞为材料：选用新生儿的包皮细胞来诱导，也得到了ipsc，但各克隆间的畸胎瘤发育方面却有着明显的差异，尤其是神经系统，有可能与NANOG and OCT4的下调有关。
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       本文中筛选ips克隆的方法与yamanaka的第一篇文章有所不同，他们用Oct4的内源性表达作为筛选标志取代了最初的Fbx15,  得到的iPS细胞在形态学、基因表达状况和表观遗传修饰方面都与ES细胞十分相似，尤其是根据形态学方法来筛选相对于G418，对ipsc的损害大大减小了，具有重要的意义。  f% r& C2 p3 Z0 |) [* ~9 \
     个人总结，希望大家指正，同时文中有句话不太理解，文中也有标注： “NANOG showed a beneficial effect in clone recovery from human ES cell-derived
4 G3 P+ [& T4 a6 ?0 Y5 emesenchymal cells but was not required for the initial appearance of such clones ”这句话该怎么理解？希望高手指点……