诱导成纤维细胞为ipsc时Oct-3/4-, Sox2-, Klf4- and c-Myc因子病毒液的量？

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     Yamanaka 在07年发的Induction of pluripotent stem cells from fibroblast cultures 中详细介绍了其ipsc的诱导过程，其中在慢病毒转染成功后，开始诱导小鼠成纤维细胞时的步骤如下：
$ }- A6 z5 e. b( D  1、从慢病毒转染后的培养基中吸取病毒液，0.45mm滤器过滤后转移至15ml离心管中备用。
) V* I# k3 Q: W: \  g# g  2、每10ml过滤后的含培养基的病毒液中，加入终浓度为4mg/ml 的polybrene，均匀混合。. ^* Y7 a) {$ p3 _: m# K
   3、将上述四种Oct-3/4-, Sox2-, Klf4- and c-Myc-retroviruses病毒液每一部分等量均匀混合。4 i' u2 E  @  X" Z: U1 _' A
  4、吸去待诱导的成纤维细胞中的培养液，并向其中加入10ml的上述病毒混合液，培养4h到过夜。
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7 J: s. M, v, l0 t原文如下：: H& p' X% j  V9 z" I5 }
   1、 Collect the medium from the Plat-E dish by using a 10-ml sterile disposable syringe, filtering it through a 0.45-mmpore size cellulose acetate filter, and transferring into a 15-ml tube.* h% \5 m, a% i- l0 b$ k+ y
  2、 Add 5 u lof 8 mg/ml polybrene solution into the 10ml filtrated virus-containing medium, and mix gently by pipetting up and down. The final concentration of polybrene will be 4 mg ml- k0 Z8 E  G& a! w8 j, g* _
–1.
$ z+ B% o& y8 f% s   3、Make a mixture of equal parts of the medium containing Oct-3/4-, Sox2-, Klf4- and c-Myc-retroviruses.
/ z+ h/ A  L, `; Z   4、Aspirate the medium from a fibroblast dish, and add 10 ml of the polybrene/virus-containing medium. Incubate the cells from 4 h to overnight at 37 1C, 5% CO2.5 R1 U; a0 D* H8 y
& P2 O/ O2 W( X; I  R2 e+ A
     我的疑问是第3步说每一种病毒液取等量混合后加到成纤维细胞中开始诱导，文章中也特别强调病毒液要用新鲜的，不可冻存，可见其并没有测其病毒滴度，只是这样等量的病毒液混合，是怎么确定每一种因子实际病毒的量的，仅是病毒液等量混合再加到细胞中，那么重复做的时候若病毒滴度有所改变，那仍然加10ml的混合液，那实际病毒量岂不是也不同了，怎么保证实验的稳定性？不知道大家在这一步的时候一般都是怎么做的？$ O1 Y. l0 ]+ q6 o% P- v. t

* D9 A4 w# {5 y9 }& ^9 M补充内容 (2011-2-14 21:25):$ h1 n6 i1 E# z# F" V
改正：上述表述有误，后文中提到他测过病毒的滴度,第3步说每一种病毒液取等量混合，等量是指等病毒滴度量么？文中特别强调的病毒液不能冻存，那在测病毒滴度的这几天病毒液是如何保存的？4 F1 A6 {4 U5 q8 M5 O) j

1 I2 T$ |4 F, A7 k补充内容 (2011-2-14 21:26):) h% q$ g8 N  L# u
此外大家在这一步时病毒量是如何确定的？