诱导成纤维细胞为ipsc时Oct-3/4-, Sox2-, Klf4- and c-Myc因子病毒液的量？

64627675

我们一直在用病毒感染不同的细胞，其实原理都是一样的，IPS我们一直在做，首先对于病毒的质量（也就是滴度）应该是要检测的，其实检测很简单，取1UL  0.5UL  0.1UL  0.01UL  去感染24孔板里面的293T细胞，48H观察荧光就行了，不需要太严格，太严格的话就要用定量了，这样就可以知道4个病毒大致的滴度差异，在用病毒感染成纤维细胞的时候，需要用一个病毒先去测试这个成纤维细胞的感染复数，也就是说要知道用多少的病毒来感染比较合适，比如SOX2病毒你可以设置不同的MOI 值 5   10  15  20，假设15的时候感染效率就达到90%左右，那么另外3个病毒也是基本上就是这个水平，至于最后要加多少，则根据你开始测定的滴度去换算，而实际上有个经验分享一下，仅供参考，比如刚才测出来的MOI值是15，你最后在实际使用的时候加大到20或25都可以，这样最后聚团成克隆的速度会快很多，如果感染的病毒少的话，成克隆的时间比较长，至于病毒冻存的问题，关键在于病毒的质量，我们一般产出来的病毒都是放在-80度的，影响有，但是冻存一次的话，还是没有什么关系的