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诱导成纤维细胞为ipsc时Oct-3/4-, Sox2-, Klf4- and c-Myc因子病毒液的量?   [复制链接]

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楼主
发表于 2011-2-15 20:54 |显示全部帖子
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Nakagawa有次来我们学校,当时我好像问过他这个问题:从20多个基因中采用排除法最终筛选出这四个基因,但怎么保证这么多种病毒都能感染了同一个细胞呢?否则情况就很复杂,不一定能筛选出这四个基因。但他当时认为病毒感染不是什么问题。
/ y8 Y+ r1 Q0 v/ n# v确实,对于实验技术非常成熟的实验室来说,它可以将每次的病毒滴度维持在一个稳定的水平,未必每次都要测滴度。0 r+ Q" l9 z8 ~
我发现,这种稳定性非常依赖293T细胞珠,有些293T随便什么质粒转染效率都低,但有些就是随便什么质粒效率都很高;其次才是基因片段的大小(当然其它过程都是按标准protocol操作),2000bp多肯定比1000bp效率要低。OSKM四个基因大小差别不是特别大,只要293T很好,能包出高滴度的病毒,就能得到iPS
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