第一次显微操作（练习）

hyde

总结一下：: [! c' r: T" F9 Z% ~3 V
1，固定针和注射针下到液滴中后有时候不再同一界面，扎卵的时候就老打滑……
4 T* P& h! o8 S* a) h2，抽和放两种力量控制不好，如注射针拔出来后针还在吸……
, F0 m" j" F+ x8 e0 d# C8 B3，出现一些气泡之类的东东，去也去不掉……

fananran2003

有同感，有时抽放还弄反，但是练习几次就全解决了. v9 \7 M# ~, L4 Y# w0 u7 w

ambassador

不错！你们是做卵母细胞的核移植吗?采卵，体外成熟都准备好啦？你们的显微操作系统是尼康的还是莱卡？

pigembryo

开始练习常常会遇到lz所说的问题，熟能生巧，接着练，坚持练，耐心、耐心、再耐心地练。9 D: I8 {' `. b& J  e3 R, B
1. 注意注射针、固定针弯的角度最好别超过30°，装针的时候，尽量使针尖和水平面（虚构的，比如载物台台面想象着上移）有个很小很小的角度，弯针的肘部落到操作皿中才不至于先接触操作面；同时固定针不要一下子落到与皿平面全接触，稍微留点空间，能保证固定针在吸持针时能吸牢；
" w& K9 X9 q: j' u" `0 Y! P/ Y2 n2. 有几个办法可以帮助改善注射操作时抽吸过于灵敏或延迟：1）用PVP清洗一下注射针，当抽吸灵敏时；2）做几个操作液——石蜡油——操作液的段，控制起来就会稍微顺手一些；3）Eppendorf的cell tram oil操作手柄使用起来比Narishige 的好控制，经费允许的话，可以考虑买一个，大概2200刀。) A$ s! Q; Y& J' G1 w
3. 出了一些气泡，不知道是什么情况，可以贴上图，帮你看看如何改进。. ~1 f2 o4 H2 _7 z- c
练习一段时间就可以了。

hyde

回复 ambassador 的帖子
8 ~; n# L  ?+ O3 C, b9 t, ?3 \  u7 f+ y
卵母细胞的核移植! q( q0 n' k2 U- e( X# N4 }
体外成熟差不多可以了  h  ~4 |$ [: O
奥林帕斯的

hyde

回复 pigembryo 的帖子' |3 b! H" a' F2 k( N

3 Q2 S0 \% E2 N/ l2 T# v今天又练了一下，有点进步了，谢谢……
  e. a5 T- s6 ]因为是拿别人做过的在练，可能培养基太少了，全是油，很黏，有些类似的泡泡油滴之类的东东。
$ c- ?* A" n0 P2 }; V问一下，在dish上如何布置液滴比较方便：放卵和供体细胞或精子
0 w- L: ?2 b: \

ambassador

hyde 发表于 2011-2-23 00:38
" h) [+ u: Q, ]- ^回复 ambassador 的帖子
5 Y. t4 I2 q9 V3 G; A- [1 r- y5 B& z+ ^  P
卵母细胞的核移植

0 W2 s5 w+ I) d, r; p+ d) E( U哦，看来你们进展挺快的啊！加油啊!我还在联系卵母细胞的体外成熟这一块呢。。。# Y5 i) U: W/ V) w) n7 n

  J' B! I8 P( L, q9 T问个问题，如果我检出的卵母细胞经过8小时在20度上下保存（用TCM199液滴在四孔板中培养），还能存活吗？

pigembryo

+ M6 G9 d: S. _' n

hyde 发表于 2011-2-23 00:48
. Y! a- |, V1 r& p: z回复 pigembryo 的帖子
/ B  i0 }2 o8 y* C: K1 L8 A3 J; S
- ?  a2 Z4 Q7 B  C  e今天又练了一下，有点进步了，谢谢……

$ l$ h4 A1 u0 e- Y2 A- I5 w7 t# o$ J3 X
可以和你的导师商量一下，找个实验室去参观交流一下，一周即可。! [% @7 j. G1 u. G- P1 ^
不知道你是哪个学校或者研究所？我看能否帮你联系联系。4 }' U" J" J9 _3 y' B2 l4 R

hyde

回复 ambassador 的帖子8 V- j2 ~- c8 }% Z: E
& t+ q' [7 J. y& U% ?3 M" K! t
我们都是熬夜做的，没试过

hyde

9 U$ ?) v* B  \- R8 O( }/ ^

5 w& g- W. r! R1 }( q9 k* x$ `! e4 r回复 pigembryo 的帖子
' a: }7 b7 D/ u0 e9 T! D
+ `7 x' F8 M' ]' c谢谢……
' X6 ]1 c8 s- e6 T0 X% B  W, Y6 d其实实验室的师兄们有自己的做法，只是做法很多不一样，意见也很多不同，现在也是建立实验体系的时候，他们还经常争论，所以想问一下……
& x) a3 ^) L- D8 g" ^. ^2 C顺便问一下您说哪里的？