第一次显微操作（练习）

hyde

总结一下：
, i( R( q/ B* e1，固定针和注射针下到液滴中后有时候不再同一界面，扎卵的时候就老打滑……* O& D& S- O& u# T  @
2，抽和放两种力量控制不好，如注射针拔出来后针还在吸……
4 _/ h  q0 A4 h* a3，出现一些气泡之类的东东，去也去不掉……

fananran2003

有同感，有时抽放还弄反，但是练习几次就全解决了4 P' b1 G" A- i) B) V& @

ambassador

不错！你们是做卵母细胞的核移植吗?采卵，体外成熟都准备好啦？你们的显微操作系统是尼康的还是莱卡？

pigembryo

开始练习常常会遇到lz所说的问题，熟能生巧，接着练，坚持练，耐心、耐心、再耐心地练。* F2 K4 Z5 H' P
1. 注意注射针、固定针弯的角度最好别超过30°，装针的时候，尽量使针尖和水平面（虚构的，比如载物台台面想象着上移）有个很小很小的角度，弯针的肘部落到操作皿中才不至于先接触操作面；同时固定针不要一下子落到与皿平面全接触，稍微留点空间，能保证固定针在吸持针时能吸牢；% c$ u8 [$ s5 k# m- }, d8 @- ]# I
2. 有几个办法可以帮助改善注射操作时抽吸过于灵敏或延迟：1）用PVP清洗一下注射针，当抽吸灵敏时；2）做几个操作液——石蜡油——操作液的段，控制起来就会稍微顺手一些；3）Eppendorf的cell tram oil操作手柄使用起来比Narishige 的好控制，经费允许的话，可以考虑买一个，大概2200刀。
9 p: ?7 b! o5 ^1 J/ f3. 出了一些气泡，不知道是什么情况，可以贴上图，帮你看看如何改进。
: j7 O% b# L4 C: Z0 B练习一段时间就可以了。

hyde

回复 ambassador 的帖子7 |  F4 @# X- Z& C; R- `( t
1 h6 J8 X! X9 Z* Z
卵母细胞的核移植2 H% p9 O; P$ J  g) q) I
体外成熟差不多可以了
5 I" J) M$ o1 B+ ?奥林帕斯的

hyde

回复 pigembryo 的帖子& p  i1 q5 J' i- B3 F
7 J# T! P9 w+ X& F) R6 ?+ d
今天又练了一下，有点进步了，谢谢……
9 X! Q. U- y1 J6 b* K! n: p8 J( U因为是拿别人做过的在练，可能培养基太少了，全是油，很黏，有些类似的泡泡油滴之类的东东。
) @- Q7 f. ~: P) L0 s" }问一下，在dish上如何布置液滴比较方便：放卵和供体细胞或精子
8 }  G" j" k) y8 @( O* {

ambassador

hyde 发表于 2011-2-23 00:38
6 ]# F/ G1 y& G: U回复 ambassador 的帖子
! z% C( `2 U: o, D) Q% l* V* O2 R4 H& O3 K9 C( C9 E$ g7 Z. H
卵母细胞的核移植

9 `  d1 a+ G0 R( G$ S6 b$ _% E" A8 L哦，看来你们进展挺快的啊！加油啊!我还在联系卵母细胞的体外成熟这一块呢。。。
5 G. O6 c( |6 V8 b
" e/ @7 l. l( V) f% y# s问个问题，如果我检出的卵母细胞经过8小时在20度上下保存（用TCM199液滴在四孔板中培养），还能存活吗？

pigembryo

1 {# _0 A0 S% G5 P4 m' U

hyde 发表于 2011-2-23 00:48 , e$ B: M) B6 z) r3 p2 P9 l
回复 pigembryo 的帖子: A/ R4 z- D6 W" r2 ^- N* ?
4 K% S: R+ X( ~4 j
今天又练了一下，有点进步了，谢谢……

3 m% ]3 J3 n+ l. Z; L; {
  a1 Z! _4 V; o2 L可以和你的导师商量一下，找个实验室去参观交流一下，一周即可。
2 \) ?) G4 k: n4 Z不知道你是哪个学校或者研究所？我看能否帮你联系联系。
1 d# ?1 y/ [$ K( W3 G

hyde

回复 ambassador 的帖子
! ]1 @5 E: u( A- \' `# G& ]  \) Z" c$ z- ~* y
我们都是熬夜做的，没试过

hyde

8 R1 [5 d& B7 R( g6 u+ M; Z) p) W
8 r. |% E, c0 N& d$ e& n$ H+ Q回复 pigembryo 的帖子
5 H6 i" J8 [  [
0 X# |( i5 Z9 o8 P( z谢谢……: W+ w" m$ f/ P: w1 i9 U- J
其实实验室的师兄们有自己的做法，只是做法很多不一样，意见也很多不同，现在也是建立实验体系的时候，他们还经常争论，所以想问一下……
- O7 _! ]( D( y: T7 b% X6 R8 F顺便问一下您说哪里的？