第一次显微操作（练习）

hyde

总结一下：
2 a2 y4 @3 K* T, ?0 g* K! X4 U1，固定针和注射针下到液滴中后有时候不再同一界面，扎卵的时候就老打滑……
- s9 h) d4 ^5 ^0 Z3 f! a2，抽和放两种力量控制不好，如注射针拔出来后针还在吸……
) J/ \  v: U  G  K3，出现一些气泡之类的东东，去也去不掉……

fananran2003

有同感，有时抽放还弄反，但是练习几次就全解决了
8 i7 P+ z: W& z  @: ~  D5 [

ambassador

不错！你们是做卵母细胞的核移植吗?采卵，体外成熟都准备好啦？你们的显微操作系统是尼康的还是莱卡？

pigembryo

开始练习常常会遇到lz所说的问题，熟能生巧，接着练，坚持练，耐心、耐心、再耐心地练。# B  d) v4 q! J: S' H, h
1. 注意注射针、固定针弯的角度最好别超过30°，装针的时候，尽量使针尖和水平面（虚构的，比如载物台台面想象着上移）有个很小很小的角度，弯针的肘部落到操作皿中才不至于先接触操作面；同时固定针不要一下子落到与皿平面全接触，稍微留点空间，能保证固定针在吸持针时能吸牢；
, w2 B6 E: `. u, x2. 有几个办法可以帮助改善注射操作时抽吸过于灵敏或延迟：1）用PVP清洗一下注射针，当抽吸灵敏时；2）做几个操作液——石蜡油——操作液的段，控制起来就会稍微顺手一些；3）Eppendorf的cell tram oil操作手柄使用起来比Narishige 的好控制，经费允许的话，可以考虑买一个，大概2200刀。- q+ j3 m- d9 ]
3. 出了一些气泡，不知道是什么情况，可以贴上图，帮你看看如何改进。; ^/ |" Q) C: y; s! `3 m' h
练习一段时间就可以了。

hyde

回复 ambassador 的帖子3 C9 j: }+ a$ n! c, v. V# ~& N
+ O: i5 x' o- a0 y
卵母细胞的核移植& w2 j2 B; {# M9 P% I
体外成熟差不多可以了
- d5 L, E4 w& g0 x/ ?奥林帕斯的

hyde

回复 pigembryo 的帖子
0 h$ K7 _( Y, Z2 m) V& s  t4 |. Z
今天又练了一下，有点进步了，谢谢……7 I$ n( l! W( o  u: X
因为是拿别人做过的在练，可能培养基太少了，全是油，很黏，有些类似的泡泡油滴之类的东东。
( V9 x; O. J$ u2 o问一下，在dish上如何布置液滴比较方便：放卵和供体细胞或精子
0 e) e- u) a7 Y: N6 P

ambassador

hyde 发表于 2011-2-23 00:38 . J' Y2 f' @3 @: O/ K. T
回复 ambassador 的帖子
& b; C+ ^* N' l/ E! d% I1 Y* D4 F; k; W& k! g4 |4 B
卵母细胞的核移植

3 J1 C7 p+ n  K
哦，看来你们进展挺快的啊！加油啊!我还在联系卵母细胞的体外成熟这一块呢。。。
. ^7 f" w% H$ f/ S; m: K- O8 G5 X
: ?! q' O% U% }  X" a3 B' P问个问题，如果我检出的卵母细胞经过8小时在20度上下保存（用TCM199液滴在四孔板中培养），还能存活吗？

pigembryo

% X0 O3 B# G: d- V8 i. l

hyde 发表于 2011-2-23 00:48
1 C) v1 L5 j4 q$ A% b3 ?回复 pigembryo 的帖子
* l% k, I. V1 N* E! s8 P8 c! K* c7 w3 c2 w8 E7 \+ R6 S; `, u
今天又练了一下，有点进步了，谢谢……

) t5 p+ p7 P3 o$ _! \1 k. h2 g8 o) I* n! O* ]9 A
可以和你的导师商量一下，找个实验室去参观交流一下，一周即可。, L4 G7 }1 S0 b7 s) g8 I0 Q! Q, Z; Y; C4 e
不知道你是哪个学校或者研究所？我看能否帮你联系联系。6 E: L3 k; M0 {9 ]( U! k4 [  c

hyde

回复 ambassador 的帖子; E: e* L$ D" ?$ {4 C. p2 E) s

; I/ [- y. g' N% E1 w1 t( Y我们都是熬夜做的，没试过

hyde

7 a9 L# E, l% {" p+ W+ d1 k$ |
3 v: a: W/ X( g
回复 pigembryo 的帖子- ?/ A, m1 B5 X& r2 M, a( l4 l) i
9 f4 r4 V0 ^, Y9 {9 o
谢谢……
$ o; a% \5 s0 P/ K1 ^! ^# C+ K其实实验室的师兄们有自己的做法，只是做法很多不一样，意见也很多不同，现在也是建立实验体系的时候，他们还经常争论，所以想问一下……
) P# U, F6 k/ G  b顺便问一下您说哪里的？