胚胎干细胞培养基有效期？？？

taoli10000

买了一瓶干细胞培养基，老贵老贵的，一瓶将近3000，使用说明上竟然说把所有的东西比如氨基酸，LIF那些加进去之后，只能在负4度中存放一个月，这个也太短了吧？500ml，一个月，用不完，要是就这样就不能用了，实在是浪费啊！！！各位能给点意见么？大家的培养基都是怎样的情况呢？谢谢啊!!!!!

inankai

我们用的是stemcell的mTeSR1，收到后4度化冻过夜，加进去氨基酸等成分后，分装，大约40ml每只离心管。- R3 J( v/ a, w, i; m8 n
－20或者－80保存，半年以上。' j) X1 t" W4 _& ?  e; J, w, D- Q6 m
这些东西说明书上有非常详细的说明，而且手册上也讲的很详细。

是鸟就要去飞

taoli10000 发表于 2011-2-23 09:02 & z$ Q; d, s; L) y2 V0 K
买了一瓶干细胞培养基，老贵老贵的，一瓶将近3000，使用说明上竟然说把所有的东西比如氨基酸，LIF那些加进去 ...

: f# W5 g9 ]1 A3 A- ]我们的是Konckout dmen ,不含谷氨酰胺和lif等，就是最基础的培养基。然后我们的血清，谷氨酰胺，双抗都是自己买后分装，冻存于-20°的。养胚胎干细胞时只需提前拿出来放于4°缓慢溶化，然后配成完全培养基。当时买DMEN时就考虑到了，里面有的成分因为公司生产-到运输-到代理公司-到自己手中，时间肯定很长，里面要是有谷氨酰胺肯定过期等因素，就买的是纯的DMEM

taoli10000

回复 是鸟就要去飞 的帖子
( W9 U6 @/ u, v% s9 U8 L' S$ Q9 v8 B1 z6 f" k' h, g
哦，这个办法还不错额。谢谢啊

taoli10000

回复 inankai 的帖子- t& f$ T' p3 }( H8 {' C

6 I! ?/ m8 R$ _, c对于这个不是很了解呢，我看好像都是说用mTeSR1来培养Human 胚胎干细胞，那它能不能用在鼠胚胎干细胞上啊？培养基成分有什么不一样吗？

fish_zbw1985

鼠ES和人ES的培养条件还是有差别的，最好按照标准的培养方法进行。比如鼠ES干性维持需要添加LIF，而人ES需要bFGF，所以适宜人ES培养的专用培养基可能就不含LIF，而这会导致鼠ES的自发分化。建议你按照标准培养指南自己配培养基，一方面节约成本，另外也能保证培养基的新鲜。我一般习惯是配2周使用的量，培养基在4度放时间长了里面的有效成分还是会降解的

fish_zbw1985

mTeSR是Stemcell公司的产品，配合BD公司出的Matrigel做人ES细胞无滋养层培养专用的，培养基配方是由Wicell研究中心设计的，有一篇已发表的Nature protocol详细介绍了这个培养基的配置方法。

片片枫叶红

taoli10000 发表于 2011-2-23 09:02
; W4 n- S, y( R, Z3 |$ T" I买了一瓶干细胞培养基，老贵老贵的，一瓶将近3000，使用说明上竟然说把所有的东西比如氨基酸，LIF那些加进去 ...

, Q; t2 q6 u# m6 \$ a% u  h) Y
不一定一次性全部配成完全培养基。
6 `- A" L3 [, v. V我们用的时候，可以根据自己的使用量来配置，配好的完全培养基放置4度，最好在一个月内用完；未混合的成分包括基础培养基4度可以保存一年、其他因子-20度可以保存2年，都是挺方便的。

taoli10000

回复 片片枫叶红 的帖子
5 x5 b3 T, K# N' E. c2 Q4 Q/ V4 f; }' {  ~2 e% o2 E- x
嗯！学习到了，谢谢啦！

taoli10000

回复 fish_zbw1985 的帖子
% i' c& g2 n, t+ M7 y3 J
; T  ~! p0 ^: Y; W# n哇！好专业哦！菜鸟学习到了，真谢谢哦！