斑马鱼胚胎显微注射（QT格式）

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呵呵～我改做干细胞之前就是专门做这个的 ：） 兄弟姐妹们要是有问题我也许可以帮点忙。我会注射，斑马鱼原位杂交，斑马鱼拍照（活的和杂交显色过的），体外合成注射用的RNA，和一些其他基本操作。

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我一般打1-2nL.   注射针我们是在鱼房做的，他们有个拉针的机器，我不知道他们怎么设置的参数。针也有不同类型的，你是要打算自己买自己手工拉吗？
; j8 S; S  U% \/ R! m/ R% E我打动物极的方法是，先把鱼卵在琼脂板上（那种特制的带有凹槽的那种，你知道的）排好，然后用个拉过的枪头（火烧一下，化了之后一拉，拉成不粗不细的一根丝丝）一个一个拨，拨得动物极朝上。然后再打的。之所以要用拉过的枪头来拨，是因为比较软不容易刺穿卵，又比较长容易操控。( ]( V- _7 H4 \, I# }
话说，你如果不是做转基因鱼，而是仅仅是打morpholino或者合成的mRNA或者类似的小分子，是不必要打动物极的，任何一个角度打了，尽量往卵的正中间插，打了就行了。
% X1 @% h$ H& B6 `在卵产出后10-20分钟，动物极一侧是透明的，另一侧是卵黄，很容易看见的。如果看不见，稍微把卵拨一下换个角度就可以看见。一般正常情况下，动物极是自然朝上的，所以拨一下就能看见。在45分钟之后，动物极就开始分裂了，就更容易找到了。8 m( X. ]6 g* ?& ~% B8 _" C( ?# a: C

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注射mRNA一般可以打400-800pg每个卵，注射morpholino一般是4ng-8ng。多了会有非特异性的表型。

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话说，你是用的体视显微镜操作么？体视显微镜下面看，是一定可以看到的啊。卵再小，倍数调高了也是很大很大的啊。不用体视显微镜估计没人能注射到动物极吧～
7 U* Z2 g2 l( {3 @) p琼脂糖板子是有个专门的模具，模具扣到琼脂糖上面，凝固之后就成了几排槽子了。你是上海的吗？是的话我的可以借你先用。
4 L5 \# v  x) q; h% T) S; j我也不知道拉针是用什么程序。你可以询问一下清华（？）的孟安民组或者神经所的杜久林组，或者生化所的李逸平组，他们的程序是怎么设置的。你也可以按照各种程序都试试，然后选一个好用的嘛。