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软骨细胞诱导液:
+ ?/ J! M; M1 z, i0 e$ q/ p& P4 @$ \9 zDMEM10 ng/ml TGF-β1
6 \$ p: S) A1 }' L, m" R& l0.1uM 地塞米松" {6 }4 k" p0 ~ X& l& ~
50 mg/ml 维生素C
. B s: Z C t# J: h6 g同时以未诱导MSCs作为对照。培养箱内进行培养,每3-4d 换液一次。诱导至21d后,进行相应检测。( ?" h+ j) I% O- ^4 n
2. 组织化学和免疫组织化学分析
/ I( ^" Q- L2 {8 H2 j6 \5 D1) 显微镜观察:在倒置显微镜下,MSCs成软骨诱导分化后,细胞胞体变圆,胞质减少。
- C8 X# h' @* W1 _* u; U2) 番红O染色:诱导分化14d后,移出培养基,生理盐水/PBS洗12孔板一次,4%多聚甲醛固定30min,PBS洗2次,1%番红O染色约3min,蒸馏水洗3次,95%乙醇洗3遍,光学显微镜下观察并采集图像。0 B% _; \+ a6 L" t/ H
3) 甲苯胺兰染色:染色2-4h。3 P5 a' y2 a! E
4) 阿利辛兰染色:染色( v1 v7 J. R9 d8 O4 B2 Z
5) Ⅱ型胶原免疫组织化学染色:4 E& }: a0 e- N7 V _. f8 {
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