请教BMSCs诱导为软骨细胞的诱导液

wang6806566

问题同上。

luoziwei

软骨细胞诱导液：
+ ?/ J! M; M1 z, i0 e$ q/ p& P4 @$ \9 zDMEM10 ng/ml TGF-β1
6 \$ p: S) A1 }' L, m" R& l0.1uM 地塞米松" {6 }4 k" p0 ~  X& l& ~
50 mg/ml 维生素C
. B  s: Z  C  t# J: h6 g同时以未诱导MSCs作为对照。培养箱内进行培养，每3-4d 换液一次。诱导至21d后，进行相应检测。( ?" h+ j) I% O- ^4 n
2.        组织化学和免疫组织化学分析
/ I( ^" Q- L2 {8 H2 j6 \5 D1)        显微镜观察：在倒置显微镜下，MSCs成软骨诱导分化后，细胞胞体变圆，胞质减少。
- C8 X# h' @* W1 _* u; U2)        番红O染色：诱导分化14d后，移出培养基，生理盐水/PBS洗12孔板一次，4%多聚甲醛固定30min，PBS洗2次，1%番红O染色约3min，蒸馏水洗3次，95%乙醇洗3遍，光学显微镜下观察并采集图像。0 B% _; \+ a6 L" t/ H
3)        甲苯胺兰染色：染色2-4h。3 P5 a' y2 a! E
4)        阿利辛兰染色：染色( v1 v7 J. R9 d8 O4 B2 Z
5)        Ⅱ型胶原免疫组织化学染色：4 E& }: a0 e- N7 V  _. f8 {

色色兔

楼上正解，俺已经无话可说了。

tjutiger

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" m# B5 }2 j) B- C* R
: X! f' h) P$ H+ }) \请问，加入铺12孔板，大概每孔多少细胞合适呢？谢谢！

luoziwei

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4 H9 c% c* D) C- M5 z  a" z/ ^% O1 Z* s' |, U
12孔板的我没做过，我做过24孔板的，每孔需要10的5次方，做软骨分化的细胞要求较多，因为是无血清培养诱导嘛

pekingxiaoe

为什么不用先离心成一个组织球培养呢？还有维C半衰期太短了，最好用L-ascorbic acid-2-phosphate。