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软骨细胞诱导液:/ B0 |7 S# ]( c
DMEM10 ng/ml TGF-β1
: e$ q# q7 F7 o( e; e0.1uM 地塞米松
5 U+ G$ A$ T5 ~50 mg/ml 维生素C
, R% i' S# a6 W. `8 t+ h' o同时以未诱导MSCs作为对照。培养箱内进行培养,每3-4d 换液一次。诱导至21d后,进行相应检测。+ O5 R& x/ j9 H% D! k) y
2. 组织化学和免疫组织化学分析
) E- Q- {9 U2 b* ?6 M Y) L c1) 显微镜观察:在倒置显微镜下,MSCs成软骨诱导分化后,细胞胞体变圆,胞质减少。+ G* Q) M0 k9 g* W$ u& B, z4 m
2) 番红O染色:诱导分化14d后,移出培养基,生理盐水/PBS洗12孔板一次,4%多聚甲醛固定30min,PBS洗2次,1%番红O染色约3min,蒸馏水洗3次,95%乙醇洗3遍,光学显微镜下观察并采集图像。3 e. B- p# {6 a" i& V
3) 甲苯胺兰染色:染色2-4h。
" r/ d9 B/ j. z9 Z9 K( {. a4) 阿利辛兰染色:染色0 y! I- T, f& a: |" Z7 M9 X" g# {
5) Ⅱ型胶原免疫组织化学染色: q( }. l( n# l( S* B! ~: q
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