请教BMSCs诱导为软骨细胞的诱导液

wang6806566

问题同上。

luoziwei

软骨细胞诱导液：/ B0 |7 S# ]( c
DMEM10 ng/ml TGF-β1
: e$ q# q7 F7 o( e; e0.1uM 地塞米松
5 U+ G$ A$ T5 ~50 mg/ml 维生素C
, R% i' S# a6 W. `8 t+ h' o同时以未诱导MSCs作为对照。培养箱内进行培养，每3-4d 换液一次。诱导至21d后，进行相应检测。+ O5 R& x/ j9 H% D! k) y
2.        组织化学和免疫组织化学分析
) E- Q- {9 U2 b* ?6 M  Y) L  c1)        显微镜观察：在倒置显微镜下，MSCs成软骨诱导分化后，细胞胞体变圆，胞质减少。+ G* Q) M0 k9 g* W$ u& B, z4 m
2)        番红O染色：诱导分化14d后，移出培养基，生理盐水/PBS洗12孔板一次，4%多聚甲醛固定30min，PBS洗2次，1%番红O染色约3min，蒸馏水洗3次，95%乙醇洗3遍，光学显微镜下观察并采集图像。3 e. B- p# {6 a" i& V
3)        甲苯胺兰染色：染色2-4h。
" r/ d9 B/ j. z9 Z9 K( {. a4)        阿利辛兰染色：染色0 y! I- T, f& a: |" Z7 M9 X" g# {
5)        Ⅱ型胶原免疫组织化学染色：  q( }. l( n# l( S* B! ~: q

色色兔

楼上正解，俺已经无话可说了。

tjutiger

回复 luoziwei 的帖子& _6 {% f  x9 Z' `" R
5 t8 n/ T. z( A" D
请问，加入铺12孔板，大概每孔多少细胞合适呢？谢谢！

luoziwei

回复 tjutiger 的帖子2 O, ^! k9 s: M) x$ P: |
# F  R' M$ e! v: ~/ z- S
12孔板的我没做过，我做过24孔板的，每孔需要10的5次方，做软骨分化的细胞要求较多，因为是无血清培养诱导嘛

pekingxiaoe

为什么不用先离心成一个组织球培养呢？还有维C半衰期太短了，最好用L-ascorbic acid-2-phosphate。