关于转染

qingbao

lipofectamine 2000转染293T如果细胞状态好的话，转染阳性率达到70~80%应该是没问题的。如果保证操作平行的前提下，效率高低不稳定可能主要还是跟细胞状态有关，以前我转染的时候基本可以保持这样一个阳性率。/ N4 M+ U; A4 p# C8 m/ j6 y( S: ]
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按照2000的protocol操作就可以，主要的几点是：保证细胞状态、传代时间（保证转染时细胞处于对数期）、细胞融合度、转然后四五个小时换液减少毒性。
7 X* T* @5 Y* D  ]( S9 w3 P+ k还有一点就是protocol中的2000的用量其实是大大过量的，我们以前只用到建议用量的一半就足够了，有时甚至用到四分之一。减少用量除了可以减少费用之外，更重要的一点是，脂质体对细胞还是有一定毒性的，减少用量可以降低对细胞毒性。这个用量楼主可以自己做个梯度实验。对于293T细胞虽说成了细胞系后都有癌细胞倾向，但是相比较于其他的肿瘤细胞系，它还是相对脆弱的，要小心伺候才是，所以降低脂质体的量也有出于这方面考虑。

qingbao

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% y3 n# a! M* R! [8 r4 u/ m- x: v对，我就是这样做的，没有问题。不过在你的系统里需要你自己做个梯度，看行不行。