Western Blot 封闭是用脱脂奶粉好还是用牛血清白蛋白好

小木梅

肯定是牛血清白蛋白更好，封闭效果更好，脱脂奶粉便宜（脱脂奶粉不能与生物素化或伴刀豆球蛋白标记的抗体一起使用，因为脱脂奶粉含有糖蛋白和生物素）；封闭的时间要看你封闭温度，我一般37摄氏度振荡半小时，或者室温一小时，或者4摄氏度过夜，这个可以根据时间安排选择，封闭后加一抗前可以不洗，因为有些人抗体就是用封闭液稀释的，没有必要洗，封闭是为了避免抗体与膜的非特异性结合。我们实验室用的湿转，电流大转移速度快，但也许转的不均匀，电流小时间会长，我一般200mA，2小时，具体时间要根据你的蛋白量大小，分子量越大转的越慢，如果时间太短或太长，要么没有转移完，要么转移过了，要摸索一下。