蛋白在4度能保存多久？

张也行

六孔板的细胞裂解收的蛋白放四度能放多久啊，我放了一星期多了，会不会降解很厉害啊？你们一般把做western的蛋白放在几度保存多久？变完性保存，还是不变性保存？0 s/ `2 D" [: c8 v; L4 a
PS：裂解液里加PMSF了，但是好像PMSF容易降解吧。谢谢... ...
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LiuRoc

我之前煮好的样品（没加蛋白酶抑制剂啥的）放在4度两天，再跑胶检测时发现20kD处的蛋白不见了，其他的成分还在；我们一个技术老师纯化后的蛋白（未浓缩）在4度放了一周，活性基本不变。

小木梅

4度放一周了应该有影响吧，你可以做个WB试试看，我做WB的蛋白是放在-20度，一般不到一个月就用了，他们说最好一个月之内就用掉；变性前保存，每次做WB的时候，取要用的蛋白量煮3分钟变性

ambassador

张也行 发表于 2011-3-9 15:54 : R( W& }! I& p7 u6 S8 C0 H5 O
六孔板的细胞裂解收的蛋白放四度能放多久啊，我放了一星期多了，会不会降解很厉害啊？你们一般把做western的 ...

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基本上应该不能用了，讲解啦！我一般是提好蛋白，加PMSF,然后放-20度，在一周内做完吧！

张也行

回复 小木梅 的帖子$ q  d0 d4 n1 Z5 E# B& C1 }
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恩  谢谢你！- ?$ Q: [! Z6 K# i' V4 c' w9 d
昨天做了一次WB，加了40ug左右的蛋白。结果条带很亮，但是有弥散。不知道是蛋白降解了还是转膜的时候有点磨蹭了... ...

yinglangbeijing

PMSF，半衰期也就30分钟左右，理论上每隔30分钟需要在裂解液中加适量PMSF，不过提蛋白过程中一般不加。 我提好的肌肉蛋白（未变性）在-20度两个月左右，降解严重，浓度降低到2左右。变性分装的蛋白同样条件保存，可以看到目的条带。（90KD）