gibco液体的dmem/f12还要不要加谷氨酰胺？急急急啊

2008xiao

买了gibco液体的dmem/f12，上面标明已加谷氨酰胺。但是谷氨酰胺不稳定，理论上两周就要补加，可是从厂家配制好液体到客户手上估计都有好几个两周了，这样的话我们买来就要加了啊。还是说瓶子开封后才算起？我想不大会是第二种吧！现在养神干，状态很差，增殖慢的很，每次传代都有大批死细胞，其他的生长因子、培养箱、PH值都没问题。不知是不是这个原因，请各位指教！

inankai

对于一般的细胞培养，没有必要。对于条件比较苛刻的细胞，尤其是增殖慢的细胞，我会添加GlutaMAX，效果还是不错的。

张也行

加一下试试，如果没有变化那就是其他的问题了，比如污染之类的... ...

2008xiao

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多谢了，目前实验室没有glutamax，订购要时间，暂时只能定期补加glutamine了！

zheng19791221

每次配置含血清培养液时添加谷氨酰胺，以维持原来的量，防止降解。如果购买的液体培养基已经添加谷氨酰胺，另外添不添加都可以，谷氨酰胺的影响没有那么大。你养的神经干细胞状态差和谷氨酰胺没有关系。另外，dmem/f12也有很多种货号的，成分会有一些差别，你需要仔细分析。

2008xiao

谢谢各位帮忙！祝大家顺利！去年底我就养的挺好，用同样的东西，今年突然就不行了。相当郁闷，本来打算三月份实验可以结束了。现在一切都不一样了，昨天取了14天胎鼠的皮层分离细胞，直接吹打的，自己拉的玻璃管，开口和蓝枪头尖端一般，火焰抛光，吹打30次，结果台盼蓝染色发现大部分细胞都死了，只剩下30%不到，以前用的一次性的巴斯德吸管（开口还比较粗糙）吹打100次也不会这样。以前分离成功的现在状态也很差，长得非常慢，球体遮光也不均匀了，传代要死很多，越传越少了。

xingyuncao

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3 f$ [' [0 R# s您好，你后来问题怎么解决了呢？我现在遇到同样的问题，去年养的好好的，今年突然不行了