脂肪干细胞的纯化？

zerollx

   最近一直在分离脂肪干细胞，但我想或多或少里面会掺杂一些成纤维细胞或内皮细胞，查看一些文献，说可以利用成纤维细胞（2h内贴壁）与脂肪干细胞（一般4h后开始贴壁）的贴壁时间不同，可用差速贴壁法来纯化，我设了一个2h的反复差速贴壁2次（即每隔2h转移上层细胞液到一个新皿，共2次），4h的差速贴壁一次，不处理做对照，结果不论是2h或4h后转移上清到一个新皿中，新皿中都基本上没有细胞贴壁，而在原始的第一次转移上清后皿中残留的细胞却贴壁了许多，和对照组差不多，也就是说能贴壁的细胞基本上都在2h内贴壁了，很怀疑这是不是成纤维细胞，暂时也没有办法做进一步的鉴定，想问一下，大家一般是怎么来纯化以减少成纤维细胞的？

zerollx

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! C4 u' q  D6 @, S5 _
/ r( C  h6 l: P2 b7 C1 x9 p补充一点：2h和4h转移上层细胞液后，皿中残留胡细胞并没有呈现明显贴壁样的成纤维细胞形态，仍然是圆形的，但DPBS很难将其洗掉，也就是说，实际上也贴壁了？

ditiger

/ n' v/ \9 Q5 s$ [
! o- E6 g9 q+ P没有做过脂肪干细胞，LZ说的应该是MSC吧。但我现在做脐带MSC，脂肪MSC和脐带MSC应该类似，我是以人皮肤成纤维细胞作对照，对于贴壁时间，我也曾做了观察，发现，MSC在半小时左右即贴壁，开始伸展开了。
" P/ F* L4 j3 H3 q  l( Q而且，在复苏MSC细胞时，不用将DMSO离心除去，而是直接加到皿里，一小时后，活的MSC基本贴壁，然后就可以换新鲜培养基了，足见MSC贴壁速度。。。
6 _$ ]% P$ L" {: t/ F  {* {7 \0 X而fib要慢一些，大概两小时左右。不过也挺快的。
+ F' e  m1 ^2 n6 i7 f3 f+ u& `另，脐带MSC与fib在形态上还是有区别的，MSC是梭形，或不规则梭形，立体感强。而fib则比较扁平。。。1 ^: O1 u, l! S* J" E9 t, o

* {* ^! @5 c! }  W2 |! G望版主多加威望 . @, K" b3 W; g4 U  ?

zerollx

嗯，脂肪干细胞也是间充质来源的干细胞，多谢指点……

天枰2012

请问楼主为什么我们的细胞要48小时后才贴壁，可能的原因是什么？