求助：求骨髓间充质干细胞冻存液的配置及细胞冻存？

stefan

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     养骨髓间充质感细胞已经有一段时间了，但是一直不是很顺利，前一段时间冻存的细胞复苏后细胞基本完全死亡了，现在又从新养了一批原代细胞，已经传到1代了，准备传到2代时就冻一部分。由于上次冻存细胞不成功，准备这次在冻存前向高手请教请教。
: l! q8 _% O# c  r* D' K5 b     1：我上次冻存的细胞冻存液配置比例为：胎牛：DMSO=9:1,胎牛的比例是否过大 ，有的网友用的比例为培养基：胎牛：DMSO=7：2：1，或6:3:1，不知到那种比例的冻存液配置比较合适？胎牛浓度过高是否会导致细胞分化？
& M/ \" N& p2 R9 b  D     2：冻存程序，我是按照4度30分钟—— -20度30分钟—— -80度过夜——沉入液氮，不知道是否正确？
& V+ z3 Q5 X2 Z0 Z$ i. N     3：细胞复苏时，血清浓度时多大，是按冻存时的血清比例还是按一般培养细胞的血清浓度?比如，冻存时按7:2:1，复苏时血清浓度是按20%，还是按一般的浓度10%呢？' m  ?' O9 i: m0 k; {; [  K
     请大家指点，谢谢！！

金戈

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关于冻存液配制论坛里已有详细讨论了，这里就不累述了。你说的浓度都不会造成你冻存的细胞全死亡的。9 |; l* L* V6 J' ?
你的冻存程序，我觉得是不妥的。你放4度30min时间似乎太长了。DMSO对细胞是一种毒性作用的。建议你改一下试一下。. g3 f8 V, o6 m" j2 X
复苏时候用新鲜培养基即可
3 v0 W( L' R; o* _* C  r希望你成功：）

sdwzg119

放4度冷冻没有意义吧，直接-20好了。