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求助:求骨髓间充质干细胞冻存液的配置及细胞冻存? [复制链接]

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楼主
发表于 2011-3-14 10:43 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 stefan 于 2011-3-14 11:04 编辑 . }  t9 t5 n: C
' O5 C. o- I9 b& h+ |. H
     养骨髓间充质感细胞已经有一段时间了,但是一直不是很顺利,前一段时间冻存的细胞复苏后细胞基本完全死亡了,现在又从新养了一批原代细胞,已经传到1代了,准备传到2代时就冻一部分。由于上次冻存细胞不成功,准备这次在冻存前向高手请教请教。
: l! q8 _% O# c  r* D' K5 b     1:我上次冻存的细胞冻存液配置比例为:胎牛:DMSO=9:1,胎牛的比例是否过大 ,有的网友用的比例为培养基:胎牛:DMSO=7:2:1,或6:3:1,不知到那种比例的冻存液配置比较合适?胎牛浓度过高是否会导致细胞分化?
& M/ \" N& p2 R9 b  D     2:冻存程序,我是按照4度30分钟—— -20度30分钟—— -80度过夜——沉入液氮,不知道是否正确?
& V+ z3 Q5 X2 Z0 Z$ i. N     3:细胞复苏时,血清浓度时多大,是按冻存时的血清比例还是按一般培养细胞的血清浓度?比如,冻存时按7:2:1,复苏时血清浓度是按20%,还是按一般的浓度10%呢?' m  ?' O9 i: m0 k; {; [  K
     请大家指点,谢谢!!
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沙发
发表于 2011-3-14 20:51 |只看该作者
回复 stefan 的帖子
9 c7 H7 g) u: _1 ?% e7 ?9 M5 f/ L/ ]: \6 G/ s) D% d( r' n
关于冻存液配制论坛里已有详细讨论了,这里就不累述了。你说的浓度都不会造成你冻存的细胞全死亡的。9 |; l* L* V6 J' ?
你的冻存程序,我觉得是不妥的。你放4度30min时间似乎太长了。DMSO对细胞是一种毒性作用的。建议你改一下试一下。. g3 f8 V, o6 m" j2 X
复苏时候用新鲜培养基即可
3 v0 W( L' R; o* _* C  r希望你成功:)
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藤椅
发表于 2011-3-17 15:59 |只看该作者
放4度冷冻没有意义吧,直接-20好了。
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