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求助:求骨髓间充质干细胞冻存液的配置及细胞冻存? [复制链接]

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楼主
发表于 2011-3-14 10:43 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 stefan 于 2011-3-14 11:04 编辑
+ t* S& d- R- R" q# j; ]% M4 V8 u% J0 F6 t5 l9 R
     养骨髓间充质感细胞已经有一段时间了,但是一直不是很顺利,前一段时间冻存的细胞复苏后细胞基本完全死亡了,现在又从新养了一批原代细胞,已经传到1代了,准备传到2代时就冻一部分。由于上次冻存细胞不成功,准备这次在冻存前向高手请教请教。
, S7 [. a+ m$ Q- V  o     1:我上次冻存的细胞冻存液配置比例为:胎牛:DMSO=9:1,胎牛的比例是否过大 ,有的网友用的比例为培养基:胎牛:DMSO=7:2:1,或6:3:1,不知到那种比例的冻存液配置比较合适?胎牛浓度过高是否会导致细胞分化?
3 w! q9 I$ }+ f- l4 `! S     2:冻存程序,我是按照4度30分钟—— -20度30分钟—— -80度过夜——沉入液氮,不知道是否正确?
' y( b# U/ X1 c0 B: Z+ F     3:细胞复苏时,血清浓度时多大,是按冻存时的血清比例还是按一般培养细胞的血清浓度?比如,冻存时按7:2:1,复苏时血清浓度是按20%,还是按一般的浓度10%呢?
* t! F9 U- E0 X6 g# t( T- s     请大家指点,谢谢!!
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沙发
发表于 2011-3-14 20:51 |只看该作者
回复 stefan 的帖子
% K. t) l  W; M) w" G; K8 U
' t2 B$ U& b# M7 p  P$ @3 v关于冻存液配制论坛里已有详细讨论了,这里就不累述了。你说的浓度都不会造成你冻存的细胞全死亡的。, [9 r: Z# [3 f, c+ b: ~
你的冻存程序,我觉得是不妥的。你放4度30min时间似乎太长了。DMSO对细胞是一种毒性作用的。建议你改一下试一下。2 `8 a6 w3 _" H1 e2 l, Z
复苏时候用新鲜培养基即可
+ g4 d5 K3 N$ s: J) A3 r希望你成功:)
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藤椅
发表于 2011-3-17 15:59 |只看该作者
放4度冷冻没有意义吧,直接-20好了。
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