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本帖最后由 stefan 于 2011-3-14 11:04 编辑 . } t9 t5 n: C
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养骨髓间充质感细胞已经有一段时间了,但是一直不是很顺利,前一段时间冻存的细胞复苏后细胞基本完全死亡了,现在又从新养了一批原代细胞,已经传到1代了,准备传到2代时就冻一部分。由于上次冻存细胞不成功,准备这次在冻存前向高手请教请教。
: l! q8 _% O# c r* D' K5 b 1:我上次冻存的细胞冻存液配置比例为:胎牛:DMSO=9:1,胎牛的比例是否过大 ,有的网友用的比例为培养基:胎牛:DMSO=7:2:1,或6:3:1,不知到那种比例的冻存液配置比较合适?胎牛浓度过高是否会导致细胞分化?
& M/ \" N& p2 R9 b D 2:冻存程序,我是按照4度30分钟—— -20度30分钟—— -80度过夜——沉入液氮,不知道是否正确?
& V+ z3 Q5 X2 Z0 Z$ i. N 3:细胞复苏时,血清浓度时多大,是按冻存时的血清比例还是按一般培养细胞的血清浓度?比如,冻存时按7:2:1,复苏时血清浓度是按20%,还是按一般的浓度10%呢?' m ?' O9 i: m0 k; {; [ K
请大家指点,谢谢!! |
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