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jiabiaohu

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楼主

发表于 2011-3-15 13:48 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

inverse PCR跑不出来带，有哪些原因咯，诸位帮忙分析分析，做了有两个月的i-PCR了，试了好多对引物，一直扩不出来带，偶尔出来带的话，连T载体测序也不对。快比不了业了，大家指点指点，不甚感激~~~

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jun8013

版主

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优秀版主优秀会员

沙发

发表于 2011-3-16 19:01 |只看该作者

P不出来有很多原因啊，退火温度，PCR体系，选了那么多对引物也没P出来，是不是本来就没有呢

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天使在微笑

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藤椅

发表于 2011-3-18 09:28 |只看该作者

我们也在做IPCR，但是到目前为止也是扩不出来带，或者是条带不清晰，希望懂得人来指导指导啊

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天使在微笑

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板凳

发表于 2011-3-18 09:29 |只看该作者

我们也在做IPCR，但是到目前为止也是扩不出来带，或者是条带不清晰，希望懂得人来指导指导啊

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firefly

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报纸

发表于 2011-3-19 12:49 |只看该作者

回复 jiabiaohu 的帖子. U+ |' h# j" G' y
@) `* i$ h; {: A8 a4 \# F
首先，可能是设计的primer的问题，在重新看看设计primer的原则，再设计。
其次，退火温度很重要的，可能是偏低了。
还有就是可能加buffer等的时候没注意浓度，要看是几乘的buffer。
还有好多因素会影响，细节很重要的。