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原理︰利用萤光染剂(bisbenzimide, Hoechst 33258)侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域,因为支原体之DNA中A-T含量占多数(55~80%),所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后,在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点,即为支原体之DNA,证明有支原体之污染。 ) w, S2 n3 c) G- A: J
· 测试步骤用间接步骤,将待测细胞悬浮液或细胞培养液接种于指示细胞培养液中(indicator cell,例如Vero cell or 3T6 cell),然后培养指示细胞再作萤光染色。正负反应对照组亦可以接种于indicator cell内作为对照。
( l: i; E# B( v3 r$ B/ {· 待测细胞亦可作直接测试,但需为吸附型细胞,培养后直接作萤光染色。有些细胞易有萤光背景,而干扰结果判读,则建议使用接种于指示细胞之步骤。 , x. N3 E0 M. {, Z; M% [ y
· 特点︰简单、经济与灵敏,广泛使用,可作为例行之侦测步骤。可以侦测不易培养之支原体,例如M. hyorhinis,较直接培养法快,约一星期即可知道结果。 S- b# }' G% w9 j# @7 q+ s
· 缺点:有时仍会有萤光背景,影响判读。
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