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标题: 请教甲基化问题 [打印本页]

作者: wqcyqy0811 时间: 2011-3-20 11:20 标题: 请教甲基化问题

请问在第一篇2006年Yamanaka的经典的iPS细胞文章中，检测多能性基因甲基化时只列出了引物，怎么才能知道它检测的是哪一段序列呢？有哪位做过甲基化，能不能告知如何确定要检测的启动子区域是哪段吗？谢谢

作者: 274996064 时间: 2011-3-20 11:34

DNA甲基化是指在甲基转移酶的催化下，DNA的CG两个核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基，形成5－甲基胞嘧啶，这常见于基因的5'-CG-3'序列。大多数脊椎动物基因组DNA都有少量的甲基化胞嘧啶，主要集中在基因5＇端的非编码区，并成簇存在。甲基化位点可随DNA的复制而遗传，因为DNA复制后，甲基化酶可将新合成的未甲基化的位点进行甲基化。DNA的甲基化可引起基因的失活。; @) |" c& F4 g6 G+ T% |" g2 M
　　DNA甲基化主要形成5－甲基胞嘧啶（5-mC）和少量的N6-甲基嘌呤（N6-mA）及7－甲基鸟嘌呤（7-mG）! s; W2 }5 ^- w }

作者: 274996064 时间: 2011-3-20 11:36

甲基化PCR使用的引物中未甲基化的C一般转化为U，而DNA中没有U，即为T。下游引物因与序列互补，故而C对应的G变为了A。简言之，上游引物中非CG相连的C应为T，下游引物中非CG相连的C对应的为A。我觉得可以转化后比对一下。引物多，可选择被普遍使用的那一对更好些。我觉得这样你就能找见了

作者: wqcyqy0811 时间: 2011-3-20 14:23

谢谢

作者: ndwzf 时间: 2011-8-9 21:52

回复 274996064 的帖子% V% h, R y' C- F( K, T
. Y, o, m, g: S' V* Y" p1 f
巧了！我也有同样的疑问。你现在清楚了吗？能否给我指点一下。

作者: cronos0910 时间: 2011-8-29 21:09

本帖最后由 cronos0910 于 2011-8-29 21:13 编辑
" t) g" Q8 }: e- c4 |4 }0 k u! Q
他是利用Methylation specific PCR的原理来做分析的，样品经过bisulfite的处理后，没有甲基化的C会转变为U，在PCR扩增过程中就会被复制成T，而甲基化的C则不会有任何变化，经过PCR扩增的放大后依然是C，最后经过定序即可分析DNA的甲基化的情形,而甲基化特异性PCR的引物皆须要使用特定软体来做设计，与一般引物不同

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