乳腺癌组织提取原代的成功率

shen_coco

我师兄是做乳腺癌干细胞方面的研究，参照既往文献的方法，
+ @4 V. ?. I: X整个硕士期间，只成功了一例，我想接着师兄的课题做下去。0 c; K# _' A6 O8 d, d( E
想问问论坛里的各位高手，有谁提取过乳腺癌的干细胞，
0 H3 W/ F& r. l% |: u乳腺癌原代提取干细胞成功率高不高啊

shen_coco

我师兄提取的方法大概如下：1，将乳腺组织剪成1mm左右
5 t* c; b4 ^$ T. S' ~- g8 {                                              2，消化6-8小时，消化液配制如下，DMEM-F12培养基，100单位/ml 胶原酶，150单位/ml透明质酸酶，5mg/l 胰岛素，10%小牛血清，双抗
& M9 X2 h: e1 I' P  ?! k0 ]& j                                              3, 80g离心4min，收集沉淀，培养基洗一遍7 O7 f  U2 Y8 {( y) K
                                              4，胰酶消化10min，加等体积DMEM-F12培养基，10% fbs中和2 Y1 ?/ S1 Y  d& K
                                              5,  400目的滤网过滤
9 R5 Z* K/ q9 A" ]" L9 s* _: t                                              6, 80g离心，DMEM-F12制成单细胞悬液) H+ \  I8 J1 k
                                              7，接种到培养瓶。
# f: ^; ]# E7 Q5 a" H干细胞培养基配方如下：DMEM-F12，EGF10 ng/ml，bFGF 10ng/ml，5mg/l 胰岛素，2% B27。
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由于经费有限，我师兄用的是普通培养瓶。大家看看，成功率这么低主要问题是在哪里呢？请各位赐教
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shen_coco

回复 亮亮燕燕 的帖子' d+ }  M4 H0 y. Y4 v
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消化6到8小时不长吧，我们用的培养基就是文献报导的培养基

shen_coco

回复 亮亮燕燕 的帖子
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3 n+ O8 @9 \5 p& S- ~1 v哦，那怎么样确定最佳培养基呢？你提肝组织的成功率有多少呢

shen_coco

回复 亮亮燕燕 的帖子& Z8 T/ U) H; _& G
6 I0 b) I2 v, K
乳腺癌干细胞好像大家用的都是同样的培养基哦，我看所有文献用的培养基都差不多一样

shen_coco

回复 亮亮燕燕 的帖子9 c1 E7 ?6 I0 ?( Y8 F
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有可能，我自己慢慢实践吧，哈哈，咱们共勉吧，祝你早日成功~~

shen_coco

回复 billywang007 的帖子! a( j( m- \& ^4 y1 |
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哦，你们具体分离乳腺癌干细胞的方法是什么呢

shen_coco

回复 billywang007 的帖子2 H4 b: n+ r. H+ X
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哦，你们具体分离乳腺癌干细胞的方法是怎么样的啊