乳腺癌组织提取原代的成功率

shen_coco

我师兄是做乳腺癌干细胞方面的研究，参照既往文献的方法，
& v2 q5 N5 `# U0 s& Q: b0 S整个硕士期间，只成功了一例，我想接着师兄的课题做下去。
% G7 h; J! J$ C( C想问问论坛里的各位高手，有谁提取过乳腺癌的干细胞，) Z( u. c5 H( r- S1 Y
乳腺癌原代提取干细胞成功率高不高啊

shen_coco

我师兄提取的方法大概如下：1，将乳腺组织剪成1mm左右
/ {7 J" r1 g+ [                                              2，消化6-8小时，消化液配制如下，DMEM-F12培养基，100单位/ml 胶原酶，150单位/ml透明质酸酶，5mg/l 胰岛素，10%小牛血清，双抗2 I# f/ J. _, I- T1 F0 m
                                              3, 80g离心4min，收集沉淀，培养基洗一遍8 Q- F; v7 y. I8 \5 [' o' q9 A
                                              4，胰酶消化10min，加等体积DMEM-F12培养基，10% fbs中和
' P) u) i- }& K# I: R                                              5,  400目的滤网过滤, K, \$ p: g9 X; l
                                              6, 80g离心，DMEM-F12制成单细胞悬液
3 F. e# ~/ H9 S" d$ a                                              7，接种到培养瓶。" c8 w1 k( z3 i4 v0 `2 W6 u
干细胞培养基配方如下：DMEM-F12，EGF10 ng/ml，bFGF 10ng/ml，5mg/l 胰岛素，2% B27。9 o6 n# _9 X6 K6 H# a" G' D1 L

. f/ x$ E& n" Y% |0 O4 U: w由于经费有限，我师兄用的是普通培养瓶。大家看看，成功率这么低主要问题是在哪里呢？请各位赐教  U( r5 H( I3 U6 c. ?

shen_coco

回复 亮亮燕燕 的帖子# I& P3 r3 S/ Z) R1 H9 C
$ Y  q& |& ~$ A3 Q8 `0 p
消化6到8小时不长吧，我们用的培养基就是文献报导的培养基

shen_coco

回复 亮亮燕燕 的帖子
9 F3 o8 n: a- o% z$ b9 H- n5 Y1 w# \! d" D, \
哦，那怎么样确定最佳培养基呢？你提肝组织的成功率有多少呢

shen_coco

回复 亮亮燕燕 的帖子: G& N2 u# g* X& ^

- L9 P# A7 J, k乳腺癌干细胞好像大家用的都是同样的培养基哦，我看所有文献用的培养基都差不多一样

shen_coco

回复 亮亮燕燕 的帖子
1 d, N% j3 w. k6 B7 ^/ O* G
& c. l) ?# u" L0 p! H1 M( B有可能，我自己慢慢实践吧，哈哈，咱们共勉吧，祝你早日成功~~

shen_coco

回复 billywang007 的帖子
  T# |5 s+ n" \* q7 v& f+ f7 {# |: c* u, C6 x5 ?, M
哦，你们具体分离乳腺癌干细胞的方法是什么呢

shen_coco

回复 billywang007 的帖子+ l* }( Y  }9 H  K7 q

1 F' |/ t% Y$ f4 V( z- _哦，你们具体分离乳腺癌干细胞的方法是怎么样的啊