干细胞传代中的问题

jefferson

不知道你说的干细胞是指的哪种- f! R/ z8 d% c$ I1 n+ g

: s+ x8 N+ k3 e: E! j如果是鼠的ES细胞, 消化吹打成比较小的团块甚至成单细胞都是可以的, 其增殖能力较强
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如果是人的ES细胞, 消化吹打时应避免团块过小, 如果成为了单细胞, 则很难生长起来.
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iPS细胞和ES细胞基本相同
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( `  x0 |8 t/ ^, u& [0 j/ D传代时团块过小克隆可能无法增殖起来最终分化凋亡, 如果过大, 传代后前几天基本是没问题的, 但三四天的样子克隆会长的过大, 内部或边缘就会出现分化的情况. 所以过大过小对分化都是有影响的." V( p. ~7 [( X- K
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在日常培养中,克隆的分化与否主要取决于培养体系是否合适稳定.

jefferson

已10倍物镜观察克隆(总共放大100倍), 克隆面积大概是视野的40%-60%时需要进行传代, 消化后将克隆整个吹下来, 此时克隆肉眼观察是小片状,在离心管中自然沉降或者200g离心沉降洗脱, 然后加培基吹打, 吹成肉眼看成细沙的粒状细胞团就差不多了, 接种MEF后24小时后观察贴壁的克隆, 大概50-100个细胞左右.
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刚开始做没经验, 不要打的太小, 可以适当大点接种, 保证克隆能够存活, 然后注意观察细胞的生长情况, 积累经验. 因为如果吹的打了, 那么缩短传代时间, 三四天后再传就可以. 如果吹的太小甚至成了单细胞,那长不起来就没办法补救了.