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MSC诱导分化的培养基   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2011-4-6 14:27 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
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请教了!!鼠或其他物种的MSC的成肌、成脂肪、成骨、成软骨的培养基是什么?谢谢!!
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沙发
发表于 2011-4-6 17:07 |只看该作者
. E7 ]$ b; s8 D* ^; s
可以参考一下,特别是第二篇介绍的比较全面。
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细胞海洋 + 5 + 10 极好资料

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藤椅
发表于 2011-4-6 17:11 |只看该作者
MSCs向骨细胞分化:( R: }, ]9 Q2 u! B3 T6 \5 u
使MSCs向骨组织分化的经典方法是用抗坏
# D* X7 |) c0 q: m血酸、β-磷酸甘油、地塞米松孵育汇合生长) N7 f7 C4 @7 x+ ?3 y& }* e
的单层MSCs细胞2-3周。这些MSCs形成集
* d) t* c& M6 q* I, \& z6 K! W- f: b落且碱性磷酸酶表达升高,随着时间延长发- i8 j; a4 O9 U. c
生钙蓄积,茜红素染色阳性。
6 Q5 G7 A; [: T6 p+ S* D* z' g0 c: V& _1 ]
MSCs向脂肪细胞分化:
( N% ?6 O$ u( A" UMSCs培养与地塞米松、胰岛素、吲哚美4 A+ L" z' J! I0 D& q8 }& U
辛、异丁基-甲基黄嘌呤孵育可诱导向脂肪细' V/ x# L. |' C& Z4 H) |  l' e7 C
胞分化。在细胞内脂肪泡积累,并且表达$ s6 a6 S9 p! y( N2 t- r6 C0 g9 V- W
过氧化物酶体增殖-活化受体γ2、脂蛋白酶
; W+ c, ]: @  i  s  k' d和脂肪酸结合蛋白aP2。最终脂肪泡融合并且; T+ G8 l* c5 X1 ?. V& t, I
填满细胞,可用油红染色检测。) ?* Z' v1 H! j( p5 Q% B; ?

( O3 }4 P' X4 \& pMSCs向肌细胞分化:9 t3 C' _; J8 w2 B$ c: ~5 h7 l" L
1982年Taylor and Jones首先报道了
: O8 A: q: c; I/ g5-Azacytidine 诱导MSCs向胚胎和成年肌细& R6 U" x6 l5 C+ q
胞分化;
  }# g/ f) F# ^8 j4 O: r1999年Phinney指出两性霉素B作用于小鼠
( O) Q7 t# |4 |6 M+ hMSCs可以导致类似肌管的多核肌纤维的形. t3 I- Z; U2 _; C2 Q7 g& q
成,并产生节律收缩性。
% @2 `+ D9 g* b. ~! w
& E; p5 M' V5 H/ a# z0 D( u# P, kMSCs向神经样细胞分化:
' w9 T+ ^8 Y0 j  P小鼠MSCs来源的成骨细胞和MSCs自身在
$ `1 d3 h" a' `3 {, C7 e神经生长因子和5-氮胞苷的作用下会成为神+ ]" {0 B8 D8 o" Q$ T
经细胞形态表达成熟神经元的特异性标志。& l* S5 q) q; L0 Z* c, i
这些神经样细胞缺乏产生动作电位的电压门- R8 F4 H" L7 _. w) {: ]5 P# t
控离子通道,因此不能称作真正意义上的神9 J: ~0 D7 d- t( H* S
经元。
! W  j8 ^0 [7 `6 N8 F3 k9 Q5 Z6 ]7 n' O  G% H0 d: x
MSCs向软骨细胞分化:  V; c+ q& K' `' P
MSCs向软骨细胞分化需要以下条件:三% O3 x$ ?6 b* p0 C7 S8 @
维培养模式,无血清营养培养基,加入6 a- @) N3 D8 N$ J7 b% Z
TGF-β成分。) @% V5 I+ s, o5 s3 a- ?
当这些条件都具备时,MSCs会丧失其成
! H( [0 {7 R5 j( ^5 q/ [纤维样形态而开始表达大量软骨特异性胞外
* ^$ Z# J  G  E- k成分,包括大量的糖胺聚糖生物合成,伴随
: J/ `1 O  P4 @# m) _3 S细胞形态的明显改变。5 _$ e4 j2 {& z2 E) R: n' h

) R3 g' e$ z* ~  M5 d1 _0 x! j. l) A
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板凳
发表于 2011-4-6 17:56 |只看该作者
想找人骨髓间充质干细胞的培养?详细的,可以稳定培养的

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报纸
发表于 2011-4-6 20:51 |只看该作者
细胞以每孔30000个的密度接种到12孔板。80%汇合时,成骨(生长培养基加入5mmol/Lβ-甘油磷酸,100nmol/L地塞米松,50μmol/L抗坏血酸二磷酸)或成软骨(生长培养基加入50μmol/L抗坏血酸二磷酸,100nmol/L地塞米松,5μg/ml人胰岛素,1ng/ml β转化生长因子,400μmol/L脯氨酸,1*非必须氨基酸)或成脂(生长培养基加入0.5mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤,1μmol/L地塞米松,10μg/ml人胰岛素,200μmol/L消炎痛)诱导培养基诱导。37OC,5%CO2湿度培养箱中培养细胞。每2到3天更换培养基。细胞生长第三周,固定细胞并检测。
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地板
发表于 2011-4-7 13:09 |只看该作者
好贴~~~~~~~~~~~~~~

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发表于 2011-4-8 19:45 |只看该作者
回复 qianqianlaile 的帖子
' H# k; n+ F7 w( O* B3 ]
! Y( @7 x0 K5 A5 u3 i  H! R6 j% r请问,细胞在诱导分化的过程中会增殖吗?如果 出现增殖要不要传代啊?

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发表于 2011-4-8 23:48 |只看该作者
回复 cheese 的帖子2 Y1 [9 t# W' h, c+ d

! S! l( `& i$ b当细胞增长到confluent condition为百分百时,才开始换诱导培养基诱导,在这个过程中不用传代,只需要定期换培养液即可
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发表于 2011-4-18 16:23 |只看该作者
谢谢.楼主

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发表于 2011-5-2 23:45 |只看该作者
回复 qianqianlaile 的帖子
' w' g5 ~, v4 I$ G5 E
1 D) X# D2 F5 U& |你好,新手向你请教。我一直做了快两个月的小鼠EMC的原代培养后并向软骨方向诱导,可是到现在原代的EMC都没养出来过,能否给点具体的步骤指导,谢谢
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