蛋白银染的问题

王乾

我现在也在做银染，目的是切胶去打质谱，刚开始染得确实很烂，不过经过几次摸索之后现在染得还相当不错，总结我自己和其他人的经验我觉得银染应该注意的事项:8 |( K3 H2 f/ |8 b; i
1. 银染主要出现在胶的表面，用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。
+ O$ ^! m% f6 {! f" G3 q2. 对于考马斯亮蓝染色的胶，可用甲醇将胶漂洗后，继续进行银染。乙酸会干扰银染，因此要确保将凝胶中的乙酸彻底洗净。如果凝胶被过度银染，可用Rapid Fix脱色，并用考马斯亮蓝二次染色。# h2 L. N7 u. A
3. 不同蛋白质对银染的反应是不一样的，尤其是碱性蛋白染色效果差。因此，不宜用银染测定不同蛋白的比例。
# M# ~/ t2 M& ~) B4. 染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择40-60 rpm.( W4 @/ \7 w9 S* s5 x0 z. p
5. 凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致，所以全程操作中都应带手套。0 \) f# D; p1 b! j& ^8 b0 j
6. 凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的，所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS的去离子水。
' b, ~, s/ l# C! d- H7. 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面，可能是在几步漂洗过程中洗得不够彻底，或是染色过程时温度太低。- i% l$ z' p7 J2 K# ?) S% s
8. 较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。
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