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shine0224

新手上路

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楼主

发表于 2011-4-9 16:41 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

巢式PCR按理说应该是特异性比较好的，我之前做的很多阳性结果目的条带非常好，而且没有扎带，这次做的怎么大部分标本跑出了非特异性的条带呢（但没有目的条带），比我的目的条带要大一倍。但是阳性对照还是非常干净的，目的条带除了，亮度也不错，难不成是与模板有关吗？还是说调整反应条件就可以解决的？请赐教！谢谢

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优秀会员金话筒

沙发

发表于 2011-4-9 19:00 |只看该作者

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' x1 T! w/ X' D5 j) i0 g/ p6 F% c
你是只出现了一次这种情况，还是最近这批样品重复出现这种情况？如果只是一次，那么可以再重复重复。如果你的pcr全部条件都没有变，而反复重复都没有出现目标条带，估计就是样本dna的问题了，你检查一下dna的浓度和纯度，还有就是目标序列在该样本中的丰度。
槽式我做的不多，一般都用touchdown，效果很好，如果实在扩不出来你可以试试这个方法。