胚胎纤维细胞固定问题 - 胚胎干细胞专区干细胞之家



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ciyang

新手上路

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楼主

发表于 2011-4-13 22:45 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

有人知道胚胎成纤维细胞做间接免疫荧光时，最好怎么固定吗？我用多聚甲醛和甲醇都试过了，可是，呜呜，细胞都飘起来了

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沙发

发表于 2011-4-14 11:57 |只看该作者

4%多聚甲醛30min，我用它固定胚胎干细胞做染色是可以，你可以试试胚胎纤维细胞行不行。

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ljs

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藤椅

发表于 2011-4-14 13:58 |只看该作者

丙酮 15min我的细胞就固定很好。

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随心

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板凳

发表于 2011-4-18 11:06 |只看该作者

试试10% 福尔马林

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tigerfish

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报纸

发表于 2011-4-21 00:31 |只看该作者

试试看冰冻丙酮+甲醇（50：50 V:V）

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f5_105

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地板

发表于 2011-4-22 10:57 |只看该作者

固定的方法要依据你之后的染色来进行，一般来说4%的多聚甲醛就可以了，有的实验也可以用冰醋酸+甲醇=1:3固定，楼上说的方法也是可行的，时间在10-30分钟间调整，我个人觉得你的细胞固定以后会飘起来应该不仅仅跟固定方法有关，可能是你的成纤维细胞本来就贴壁情况不好，你可以加点明胶铺皿再种成纤维细胞试试，或者用传代过后的皿用PBS洗两遍再种细胞也可以的。做染色的时候动作应该尽量轻柔。