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胚胎纤维细胞固定问题   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2011-4-13 22:45 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
有人知道胚胎成纤维细胞做间接免疫荧光时,最好怎么固定吗?我用多聚甲醛和甲醇都试过了,可是,呜呜,细胞都飘起来了
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沙发
发表于 2011-4-14 11:57 |只看该作者
4%多聚甲醛30min,我用它固定胚胎干细胞做染色是可以,你可以试试胚胎纤维细胞行不行。
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藤椅
发表于 2011-4-14 13:58 |只看该作者
丙酮 15min我的细胞就固定很好。
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板凳
发表于 2011-4-18 11:06 |只看该作者
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试试10% 福尔马林
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报纸
发表于 2011-4-21 00:31 |只看该作者
试试看冰冻丙酮+甲醇(50:50  V:V)
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地板
发表于 2011-4-22 10:57 |只看该作者
固定的方法要依据你之后的染色来进行,一般来说4%的多聚甲醛就可以了,有的实验也可以用冰醋酸+甲醇=1:3固定,楼上说的方法也是可行的,时间在10-30分钟间调整,我个人觉得你的细胞固定以后会飘起来应该不仅仅跟固定方法有关,可能是你的成纤维细胞本来就贴壁情况不好,你可以加点明胶铺皿再种成纤维细胞试试,或者用传代过后的皿用PBS洗两遍再种细胞也可以的。做染色的时候动作应该尽量轻柔。
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发表于 2011-4-22 14:27 |只看该作者
4%的多聚甲醛和甲醇应该都可以,但如果是做免疫荧光实验,个人比较倾向于采用甲醇,因为多聚甲醛不可避免的有自发荧光现象,影响观察
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