RNA抽提 测OD值原理

dqm185

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主要的楼上的已经回答的不错了。我再补充点细节。. r/ w8 }+ O# M) z0 p
核苷酸和核酸在紫外光区具有特征性的吸收光谱是由于其嘌呤碱或嘧啶碱具有共轭双键，最大吸收峰在26Onm。紫外分光光度法测定核酸的浓度时，1个吸光度值(lA)相当于50μg/ml双螺旋DNA；401μg/ml单螺旋DNA或RNA；20μg/ml寡核苷酸。
4 {* V( c! {3 M6 ]! U" J1 a7 S对于蛋白质，其中也存在着含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸，使蛋白质在270~290nm波长范围内具有吸收紫外光的性质,其中酪氨酸的λmax为275nm，色氨酸的λmax为280nm，苯丙氨酸的λmax为257nm，在此波长范围内,蛋白质溶液的吸收值与其浓度成正比,可作定量测定。但是，值得注意的是不同类型蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量不同，所以测定270~290nm波段紫外吸收也会因每个样品中蛋白质氨基酸组成的差异而有较大的变异。
& I& G& M: S1 o5 h2 v2 h+ u纯DNA样品的OD260/OD280 大约为1.8，高于1.8可能有RNA污染，低于1.8有蛋白质污染；纯RNA 样品的OD260/OD280 大约为2.0.' v$ Z3 F  @. c; D5 R4 b+ ?
更多细节参考：http://jpkc.hnadl.cn/Able.ACC2.W ... amp;type=&name=
* u  k( w  _" R( @http://www.biotechworld.cn/news/display/article/9027
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dqm185

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  G1 I& o4 x8 VRNA降解是个好问题，找了半天暂时没找到标准答案。但是，DNA变性时，DNA双链发生解离，共轭双键更充分暴露，故DNA变性，DNA在260nm处的吸收光度值增加，并与解链程度有一定的比例关系。
3 R9 I' C. b' `1 ]- W$ D所以对于RNA降解导致OD比值变化，个人认为，还是应该从其吸光原理和RNA的可能的三维结构考虑。虽然RNA理论上是单股链，但是其中可能有序列是互补的而产生局部双链情况，遮盖部分共轭双键，当RNA降解时，可能使三维结构破坏而导致共轭双键暴露更充分，吸光值增加。
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4 }3 m3 q/ H6 P, z5 M参考：http://zhidao.baidu.com/question/6886513- V6 {# b: i3 Q% f3 A/ k! }' Y
http://www.fruit8.com/?action-blogdetail-uid-15355-id-3216
6 h2 n* L/ ?- v, N  I; W3 \3 U% K8 D- Hhttp://nt.xhbxx.com/html/news/819.html