RNA抽提 测OD值原理

王乾

A260 /A280 比值低
% L" H2 [- t6 ^3 |% O/ _蛋白质污染：确保不要吸入中间层及有机项。减少起始样品量，确保裂解完全、彻底。加入氯仿后首先要使劲混匀，并且离心分层的离心力和时间要足够。解决办法是用 PCI 重新抽提一次，再沉淀，溶解。 7 a; |5 R  y7 a- i' J' [5 ?
苯酚残留：确保不要吸入中间层及有机项。加入氯仿后首先要使劲混匀，并且离心分层的离心力和时间要足够。解决办法是再沉淀一次后，溶解。 $ c7 s# g- U  z0 y  |
设备限制：测定 A260 及 A280 数值时，要使 A260 读数在 0.10 - 0.50 之间。此范围线性最好。
2 H- s8 t" D" T) H1 e用水稀释样品：测 OD 时，对照及样品稀释液请使用 10 mM Tris，pH 7.5。用水作为稀释液将导致比值的降低。 $ S4 m3 [( g" W/ y5 Q; ^
　
8 z8 x0 y: F& Z* q; qA260 /A230 比值低 " c! s  u& G) y# o2 u1 f
抽提试剂残留：确保洗涤时要彻底悬浮 RNA，并且彻底去掉 75% 乙醇。解决办法是再沉淀一次后，溶解。 # p/ i0 B0 q2 C4 a; N
组织内杂质残留：一般为多糖类杂质。解决办法是改用其它办法，如 LiCl 沉淀。
8 r8 z' O# }6 j" D/ |* u1 B设备限制：测定 A260 及 A280 数值时，要使 A260 读数在 0.10 - 0.50 之间。此范围线性最好。