关于明胶铺板的操作

wang66

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6 P( C$ c$ `3 e3 ]请教各位前辈：
! ~- o7 K6 v- O' H" v0 F1.配制好的0.1%明胶一般是室温保存还是4℃保存？我在网上看两种温度保存的都有。* q& t, x8 |/ m# v) _8 i# r6 T
2.稀释后的明胶到底要不要高压灭菌？7 n* M2 X$ T; e7 ^/ m1 J1 |' p
3.我看有的帖子说“培养箱中包被1h以上，能过夜是最好的。用前取出，吸弃明胶，加入1-2ml培养液(10%血清即可)冲洗，稍微吹干即可使用”。是把室温保存的明胶在铺板后放入培养箱1-24小时，然后吸去并冲洗就可以了么？
1 ^! c& }- J5 R7 |- ~4.包被好的细胞板是必须要马上用还是可以放置一段时间在开始养细胞？
; n  R, F: E& J5 q6 C5.铺板前用的明胶以及铺好明胶的板子还需不需要照紫外？* |* G  l1 H9 d  d% p- o( x0 e

$ g8 B+ U, Q1 C$ M" R0 C先谢过各位前辈指导了~

sunny2829

1、配制好的0.1%明胶可以室温保存也可以4℃保存。我习惯4℃保存。
# |6 r9 K9 W2 o  T$ N! o4 L) M2、我是细胞实验，稀释后的明胶是要高压灭菌的。
1 c4 l0 D6 q" ^; U3、明胶铺板，37℃，1h以上就可以吸走明胶，用PBS冲洗一下（感觉用培养液太浪费了）。包被1h，个人认为已经达到细胞贴壁的目的了，没必要过夜。至于过夜包被明胶是否更好，并不清楚，你不妨摸索一下~~~~
# b+ D# j7 S5 U0 \  F, x1 C! ~) Z3 S4、明胶用前灭菌了，又在超净工作台上操作，没必要照紫外。
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痞子的烟头

其实没有你想的复杂，0.1%明胶配好后，灭菌，4度保存可以放很长时间，用时包被室温包被1-2小时，37度包被半个小时就可以了，做FEEDER时，直接吸去明胶可以用的，不需要紫外照的！

懵懂干细胞

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4 e+ J8 H8 J2 }6 r# I习惯4°，其实没那么麻烦！
: K- T9 d- Q" c: L: U2 d+ H我都是铺好了放在培养箱37°十几分钟就用！3 Z- j9 G% v7 {# {: z9 X7 |
我这样养的MEF状态也蛮棒！

573639471

0.1%明胶配好后，高压灭菌，4度保存，用时铺板37度至少半个小时，就可以吸弃，铺滋养层细胞了

st_oliver

我们是0.1%的明胶提前配好，-20°保存，用时化一支在4°短期使用直至用完，使用时37°包被至少半小时，用时提前吸弃，37°培养箱待干，然后就可以直接铺feeder了。希望可以帮助你。

gact

吸取明胶后，不用PBS冲洗孔了？，直接铺MEF ？

yuyan

请问各位，1%的明胶配好之后不灭菌，用细菌滤器过滤后使用可以么？

st_oliver

回复 gact 的帖子# D0 C% v* x; E4 R
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在培养箱中已经干了的，应该是不用冲洗了！

st_oliver

回复 yuyan 的帖子
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我觉着还是高压一下比较好，毕竟你养的是细胞，还是比较容易污染的，还是小心的好！