求bFGF的工作浓度以及配方

yangpan521

本人在诱导过程中遇到配液有麻烦，想了解bFGF浓度为多少时效果最好，

痞子的烟头

bfgf 配都是用BSA配，工作浓度看BFGF活性，一般4ng/ml  我用过20ng/ml的！

panyanfei

目前做的都是用0.1%BSA溶解的，配成浓度为8~10ug/ml的储存液，用时按1000X加入培养基中，即配500ml培养基就加500ul的bFGF储存液，工作浓度为8~10ng/ml，而BSA是用灭菌的无钙、镁的PBS溶解，再经0.2um滤器过滤。

sarah19860420

我们实验室配的培养液终浓度是100ng/ml。这个合理吗？

xiangchou812

楼上的优点浪费了把，一般用5ng/ml就可以了。

sarah19860420

回复 xiangchou812 的帖子) y6 ^* W0 {! N9 K8 }1 W
6 g" f% c8 f# Q! y& M
我们的人的IPS长的有点太慢了。然后这边的老师让我加这么多。我再想他是不是把单位搞错了啊。和他确认后，他还是要加100ng/ml.晕死啊。加太多会有什么影响呢

xiangchou812

这个也就多加了几倍，应该也没什么副作用。

song58

以前我做过一个课题，就是用DF12，NAA，Glu，2-ME，N2，B27，加上100ng/ml bFGF，在Matrigel上养hES，至少能养15代以上。
( g, _& v, D7 X  |; x$ }BSA我用过SIGMA的Fraction V，感觉很细腻，杂质很少，0.22过滤后很好用。- ~0 v6 Z6 e) p$ e) v4 E" L
iPS长的慢有时候也很正常，有时候我会10天才传一代。另外，feeder的质量很重要，尽量不要太密。

sarah19860420

回复 song58 的帖子
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为什么要用100这么多呢？能否告诉下原因。我们的IPS养了一个多月了，才长出来，结果传代又被我传毁了。悲催:(

henryjia

生长速度除了有族群区别外，往往可以看作是细胞系健康与否的标志之一。100MG/ML有点太夸张。建议找相关文献找一下依据。