广厦千万间——细胞冻存新技术

deron

主题：冻存保护剂中用于细胞银行治疗的活性冻存组织功能性细胞生物材料5 m- _' l& v" C/ \; s

) L- G& L) K( u+ _9 ]7 e说明：原文来源自http://www.liebertonline.com/doi/abs/10.1089/ten.TEA.2011.0003，由干细胞之家新闻小组成员deron翻译（转帖请注明）。
: I: o/ S5 l8 J. k
' Y8 J: r. ^) M翻译内容：
6 v' V/ _; H5 i8 a# m组织工程与再生医学中细胞生物材料体系的应用是生物医学里的一大挑战，这种材料在保存细胞的同时，可保存组织功能性结构。在本研究中，我们优化了组织结构和冷冻保护参数，同时评估了牙髓干细胞（DPSCs）在包裹和冻存后能否维持原有特性。牙髓干细胞拥有干细胞的高增殖力。最适的细胞生物材料凝胶结构包含——2%凝胶藻酸盐：100mM的CaCO3：200mM的葡萄糖酸-δ-内酯（GDL）=4：1：1，同时用于冻存的冻存保护剂（CPAs）是包含10%乙二醇（EG）、1.0M蔗糖和0.00075M聚乙烯吡咯烷酮（PVP）的DMEM。（本研究）通过细胞活力（台盼蓝、活/死分析）、DPSCs的增殖力和结构中扫描电镜（SEM）观察到的微结构来证实（冻存方案的）最优性，同时用流式细胞术（FACS）分析冻存前后的表面抗原变化。结构上并无显著差异。综上所述，本研究阐述了前景广阔的生物材料是最优的细胞生物材料凝胶结构和冷冻保护剂。在细胞银行治疗可用生物材料和病人特异性产品（比如药物送递系统）的发展方面，清晰明确的包裹/解冻体系是一个极好的选择。3 y/ y0 {% ]3 e* a* D/ k, L
原摘要：The application of cell-biomaterial systems in tissue engineering and regenerative medicine is an important challenge in biomedicine, which preserves not only cells, but also tissue-engineered constructs. In this study, the constructs and cryoprotectant parameters were optimized, and it was evaluated whether the characteristics of dental pulp stem cells (DPSCs), which have high proliferation ability as stem cells, were maintained during encapsulation and cryopreservation. The optimal cell-biomaterial gel constructs with the gelation rate of 2% alginate: 100 mM CaCO3: 200 mM glucono-δ-lactone (GDL) = 4: 1: 1 and suitable cryoprotectants (CPAs) used for cryopreservation were Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) supplemented with 10% ethylene glycol (EG), 1.0 M sucrose and 0.00075 M polyvinylpyrrolidone (PVP). Optimality was confirmed by cell viability (trypan blue, live/dead analysis), the proliferation of DPSCs, and the microstructure using scanning electron microscopy (SEM) in the constructs, and surface epitope by flow cytometry analysis (FACS) before and after cryopreservation. There were no visible differences in the structure. In conclusion, this study indicates that the optimal cell-biomaterial gel constructs and the cryoprotectant are promising biomaterials. The defined encapsulation/thawing system offers an excellent option for cell-banking therapy to be developed with ready-to-use viable biomaterials and patient-specific products as drug delivery systems.
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! ]* _/ `; _3 P5 ]& d原文链接：http://www.liebertonline.com/doi/abs/10.1089/ten.TEA.2011.0003（求原文）
. A, k* n4 g9 V# T, o* X9 i! h7 K6 o
说明——翻译方面还请大家指正

sunny2829

求原文~~

gact

包含10%乙二醇（EG）、1.0M蔗糖和0.00075M聚乙烯吡咯烷酮（PVP）的DMEM  
% ^% k5 X5 \+ m' ]这个保护剂配方，可以单独使用于细胞保存？6 M0 [9 E9 X0 Q8 R

deron

回复 gact 的帖子) p8 s4 A: a; T6 I5 p  L
. s. B2 s& ]5 B0 B* g
虽然没用过这个方案，不过理论上个人感觉是可行的。
, R, O. J) {4 E1 k- L! n5 q乙二醇属于渗透性冷冻保护剂，作用类似于二甲基亚砜，都是渗入细胞内部阻止胞内冰晶的形成。结合蔗糖和PVP的大分子非渗透性保外冷冻保护剂，双重保险值得拥有! z( ]4 J8 w' C  Q
唯一存疑之处是冷冻保护剂通常应该加入适量血清以起到缓冲作用，即便是serum-free冻存液，最好也加入适量的白蛋白。$ I" F5 S2 y& X5 K$ W
还是拿到原文后再看看吧~

gact

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' R) ]+ R% L3 b5 t2 a; H
; J, U$ u5 a0 l& T是啊，如果真正没有血清的话，，估计保存时间不会很久。另外，我们发现，冻存管的质量也很重要，有些是比较容易污染的，似乎是出厂就没处理好。

deron

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3 ]; I& H7 j. ]# K& |9 ]* U  e' ]8 t5 J, u/ f) M7 ]
如果细胞珍贵的话，还是用品牌的耗材比较放心。比如corning、axygen之流。

deron

偶的叮当……- k9 X/ O  Q! v( m6 `

前途似锦

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: s8 u  E+ A7 ~' f  A1 `; y# Z
. d. N2 J: k4 _6 k, M- [买回来的冻存管一定要灭菌啊，难道直接用？他们有的包装真的不是很好，即使是进口的

deron

回复 前途似锦 的帖子# |0 L* v5 \0 h( P5 u

4 O* h" Q5 V+ M' a高压蒸汽灭菌会造成塑料的变形扭曲，甚至影响管子的密封效果。建议不要灭菌

前途似锦

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* q# I' N# }! Z: L$ k' W; w! x  I
可是俺都是灭菌才敢用，因为冻存管有的就拿个密封袋装着过来的，不灭菌真不敢用呵呵，这么几年，感觉没有影响到密封效果。可能是有的质量不太一样吧。