各种诱导iPS方法

hualin840518

回复 hualin840518 的帖子7 _" U* a( ]* y5 n

4 q: z# i* A9 U# G5 Thttp://www.stemcell8.cn/thread-37568-1-1.html
0 P7 \2 P+ _/ G7 Y7 r海洋注：本文跟帖中有很多不同意见 本文是否存在作假可能 欢迎大家参与讨论 发表自己的观点  g7 g, n4 x; M8 H  g
9 D+ j, J5 C, }, {8 P
当初我对这个帖子没有发表任何意见
% f5 {/ k- d. h- Q/ m2 I! f其实我觉得这篇文章做得很好: b0 \/ {3 m/ v  b
写的也很好，很值得大家学习和拜读！0 l( W4 n  K, L
" [# q! I0 s- d/ X
论坛markllq的观点
+ s' Q3 d' x4 w4 q这篇文章中利用miRNA302/367 在除去SKOM的情况下直接诱导出iPS，而上个月中科院广州生物院裴端卿组在JBC发表利用miRNA302/367显著提高了iPS效率，两篇文章的区别就在有没有加四因子诱导，最后发出来的文章差别很大，国内科研在创新方面还是不够给力啊！
) W3 F5 z. |) j" T2 f0 |; N. Q8 ?& h/ o$ h: I) A
这点值得大家深思！
& e8 C. K0 o$ R8 H% ]  m7 F

hualin840518

回复 细胞海洋 的帖子8 Q2 O. x6 \7 q9 Q9 i- p

+ ^5 A; G: {, o我已补充了两篇关于microRNA诱导iPS的形成的文章3 L( p; N4 k  z9 f- d3 `9 R
检索过程中发现
+ i  S- O" d" [/ w5 h其实这个论坛已经有了
+ ]! x; n) j  _7 \参考下面这个帖子：
& C, L! S  C' N+ \- I) i, Ahttp://www.stemcell8.cn/thread-37568-1-1.html
0 s8 V; R7 R  v/ c5 Y海洋注：本文跟帖中有很多不同意见 本文是否存在作假可能 欢迎大家参与讨论 发表自己的观点
# S. `. Z5 l5 X$ `) Q* B" Z# S6 c% |  F
我加以了总结和补充！
# N' T0 `, b. Y6 X; M$ D9 m文献导读文献导读----Highly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming
5 g" n& b0 S/ R2 \  R1 S和上个月中科院广州生物院裴端卿组在JBC发表利用miRNA302/367显著提高了iPS效率的文章！: I0 A" O8 ?& \& J! k5 o

hualin840518

回复 hualin840518 的帖子$ k5 ~8 o; p0 E+ Q3 d8 P% T) b
/ a1 L- E& Z' u1 d0 ~7 I% l/ I
Cell Stem Cell：microRNA诱导iPS的形成
, @% L& H' t# z文章全文

hualin840518

回复 hualin840518 的帖子, I" b) W1 C( B

' y$ z. P/ G& b: c& H7 G文献导读----Highly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming9 f, g, v% q( h8 O
题目：Highly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming of Mouse and Human Somatic Cells to Pluripotency
. I, Y% x( L! w; ?: X. R& U初读此题目，眼前了一亮，曾记得当初就有过表观遗传修饰获得ips的想法，如今已被实现了。% Z1 J: S: N% L# z7 S6 ]) D* m
作者：不出所料，又有中国人，21世纪，生物发展看中国) t% p1 N! E. l
期刊 cell  stem cell0 {! `( z; Y+ b2 A2 N: O8 A
一 summary
1 f+ e* t! i7 ?- {: P0 l, d摘要主要介绍一下过去的研究背景，自己的研究相比以前的研究的创新性。以前是用四个转录因子oct4、sox2、klf4、myc来获得ips，现在用miR302/367,来激活OCT4，然后抑制hdac2，我们研究发现miRNA和hdac是获得ips强有力的手段。8 H) {1 ^) f' n! h
1 。。。。open the way to& W& _* V' M% ]! D
2 we show here that expression of1 K( n, S7 o4 g9 ?' Q
3 we found that 。。。is required for
. Z$ e! e' o$ l( B! ^; m* P4 thus our data show that 。。。pathways can cooperate in a powerful way to reprogram 。。。
2 w4 S# q' q& @% ~( D# t二 introduction
( j) @7 O2 A$ A0 L- K* c1 一开始说一些象征性的话，说此领域很有前景很有意义
# V' x8 ~/ F3 ~! T2 然后又说当前存在的问题，即使有些问题已经被解决了，他也说没有解决，说自己的解决了，真实太虚伪了8 V' W& s4 d! _" T  |5 L) c. n
3 说一说此前的研究，说明我的研究的研究方面的一些进展，我那是在这些研究的基础上进行的. ?+ M" W% }+ ^$ J) L
4 吹嘘一下自己的研究发现，解决了哪些问题，证明了那些知识
: s5 v5 g2 [( d# K1 the 。。。。。。although poweful，there are currently several limitation- c- e; c! z/ T
2 these limitation hamper the use of
/ s; U3 [7 w4 A, h1 M" w0 s3 we show that the expression
' `4 o1 b$ U6 R; i. L1 R  Q8 f& {三 研究结果& A. c6 h/ T3 \- p. W* d* R8 m8 d
研究结果一本分成好几部分展开，每一部分都有先关的实验做验证得出某些结论& B2 }1 P& _  ^5 S
1 miR302/367 Reprograms Fibroblasts to an iPSC Phenotype, ~$ O$ B  G* {/ E) o+ {
首先证明两点，第一是micR02/367确实能偶诱导产生ips，第二个选用的什么载体，怎么怎证明转进去了。) U, I" k; g* Z  X/ K
（1）作者选用了含有oct4-GFP的细胞系
8 b( r8 }4 J7 p" J7 n（2）作者构建了慢病毒载体，含有micR02/367，转染了这个细胞，发现了6天就能产生干细胞一样的形态克隆
# w: k) m7 @. F8 h+ t（3）组着有用普通的产生ips的方法，8天了还没有产生ips
  X% `7 `$ p% R# x5 i（4）作者检测了其他几个转录因子，发现也高表达4 G' }9 ^% x# e; c+ I8 j5 n. T
（5）不用VPA的不能够高效产生ips& @* \/ p: M2 Y& |
2 miR302/367 Reprogramming is More Efficient Than OSKM Reprogramming
. i% A' v( z3 I' Q作者要证明高效性，就要一时间为比较，这个实验没有什么
. I) w. V, S3 I4 B- b- X3 miR302/367 iPSCs Can Generate Derivatives of Mesoderm, Endoderm, and Ectoderm in Teratomas;Generate Adult Chimeras; and Contribute to the Mouse Germline# N: h/ {4 S3 q! F2 u+ Z4 ~2 F! _0 t
这个实验必须要让人信服，产生的确实是ips ，并且具有全能性，作者用了能偶注入小鼠体内产生畸胎瘤实验证明具有干细胞的特性。要证明能产生各种组织器官，选用了能偶表达半乳糖的细胞，吧ips注入胚胎内细胞团，产生嵌合体小鼠，结果证明了缺失能分化为各种组织，也包括生殖细胞8 O6 z, {3 h# z
4 miR302/367 Can Reprogram Human Fibroblasts to a Pluripotent State More Efficiently Than OSKM Factors. u3 c9 z1 r, O" g6 a4 p2 W
作者首先在小鼠细胞做了实验，现在又用人体细胞做实验，证明其高效性
  C1 r# h  u7 Q" i5 miR367 Expression is Required for miR302/367 iPSC Reprogramming  \$ p* n# L' z$ U3 Z( G) N
往后的实验都不是很重要了，无非要证明其精确性，证明其工作要做的完美" D0 G& {1 `" a0 G
英语句型总结& ~! ]  J9 n  L" _) v8 {# v5 v5 S
发现了一个规律，开始的每个研究结果开始还是做一些背景的介绍，随后的几个短路就用验证的句子去写
3 j& {+ H7 A" z/ ^4 e0 I7 h1 to test this hypothesis，we1 A7 \) s7 |  u. S. C
2 to better qualify the increas, p- N; N  p+ e) {5 ^# u, q* j
3 to test weather 。。。contribute to3 P( {$ Y, h1 e% x& t; q
4 to assess whether  we abserverd
2 C' k  ]6 w# o% g# v5 recent wevidence has poroverd, \) Z1 I& D2 w$ w# P; b
好的文章不仅给我们很好的启迪，写作也像是一首诗
3 ?. i- h  c8 p; G总结% m6 D8 E3 S% m) V# v
总结要分为五个部分来写，第一部分是总结；第二部分是回顾；第三部分是把机理说说；第四部分，再说说我们的研究；第五部分要与第一部分相对应。
/ F! p7 [5 x, Y1 g7 ^5 r总结一般要四五段左右，最后一段要总结我们的贡献，以及展望外来的研究趋势
& D2 O! a+ |; D8 I( ?+ g1 current stragise 。。。。we show that ，，，，with ongoing advence! ]) X' P2 F6 e4 F5 E! H! z# L
2 previous study have demonstrate
2 @4 x8 F+ y8 A4 m% O  t0 R& L4 w3 our study show that+ @5 |1 G* M, b* R3 l; j
不同的文章不同的期刊写作的风格是不太一样的，但是还是有些规律可循的

hualin840518

回复 hualin840518 的帖子7 @+ X. o3 ~7 Y8 v6 b0 I

2 O4 a/ p8 V8 ~* K3 k7 mCell Stem Cell：microRNA诱导iPS的形成
5 v' B  S7 i/ ~7 R美用miRNAs制造出诱导多功能干细胞，比利用4个转录因子的效率提高了100倍
, T! o4 y" d8 c* B. o- q据美国物理学家组织网4月7日报道，美国科学家首次用实验鼠的微小RNA（MicroRNAs）对很容易从皮肤活检中得到的纤维原细胞进行重新编程，制造出了诱导多功能干细胞（ iPSCs）。 科学家可据此制造出特定病人的iPS细胞，以用于药物筛选和身体组织再生。 相关研究发表在《细胞—干细胞》杂志上。
8 ?2 {; ?  l( \+ b负责该研究的美国宾夕法尼亚大学医学院医学、细胞和发育生物学教授兼再生医学研究所科学主管爱德华·莫里西表示，这是科学家首次未使用4个转录因子制造出iPS细胞，并将效率提高了100倍。
# P7 f; a0 v, D$ a2006年，日本科学家山中申弥利用病毒载体将4个转录因子的组合转入分化的体细胞中，使其重编程而得到了一种类似胚胎干细胞的细胞类型，这就是iPS细胞。 随后很多科学家陆续报告称，他们使用这4个转录因子上的变异制造出了iPS细胞。 iPS细胞具有和胚胎干细胞类似的功能，却绕开了胚胎干细胞研究一直面临的伦理和法律等方面的障碍，因此，其应用前景非常广阔。9 \( P7 D. ^+ o) K
从事该研究的科学家希望，有朝一日能有效制造出不同病人的干细胞以研究人类疾病；制造出一个细胞“仓库”以让人体自身的心脏、肝脏等细胞再生。 尽管前景诱人，但制造出iPS细胞还面临着效率低的问题，使用人体细胞制造iPS细胞的效率尤其低下。 另外，添加新基因等方法可能有导致癌症的副作用，因此，提高iPS细胞的转化效率和安全性成为近年来科学界的研究重点之一。, I* }! M; \, V& c' X
以前，科学家使用转录因子让成人细胞重新编程，每使用10万个成人细胞得到的iPS细胞不足20个。 而新实验中，科学家使用微小RNA来让成人细胞重新编程，结果，每使用10万个成人细胞得到的iPS细胞高达1万多个。5 g0 n# }5 v2 p* T2 O) Z$ k! m  T
莫里西表示，这种方法能制造出iPS细胞让我们很吃惊，而且，其效率比山中申弥首次提出的转录因子方法高很多。 至于为何在制造iPS细胞的过程中，微小RNA和4个转录因子的作用原理如此不同还需进一步的研究。
6 K+ o2 p; S. V3 g莫里西实验室研发的微小RNA方法产生的iPS细胞能制造出老鼠体内几乎全部的组织，包括生殖细胞、精子和卵子等。 该科研团队目前正同其他科学团队合作，试图将这些诱导多功能干细胞分化成心肌细胞、造血细胞和肝脏细胞。6 t" a3 p8 F. b* U0 J4 K' {% e
莫里西表示，在用病人的样本制造iPS细胞的过程中，这种方法不仅效率高，而且可以得到更多产品。 他们希望制造出人工合成的微小RNA，来将成人细胞转变为iPS细胞，最终得到包括肝脏、心肌或神经细胞等在内的各种细胞。. W  T% J$ f# u' Z9 H  `2 C; S
美国心肺和血液研究所的肺病研究室主管詹姆斯·基莱认为，有效制造出诱导多功能干细胞对其治疗用途至关重要，新方法朝科学家的最终目标前进了一大步，也将促进其他干细胞研究的发展。
/ {% x9 u; ^1 n, q6 nCell Stem Cell. 2011 Apr 8;8(4):376-88.' y: Z% g: ?  C" `* n( Z( Y, w0 t
Highly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming of Mouse and Human Somatic Cells to Pluripotency./ [3 L9 [: _* A4 t
Anokye-Danso F, Trivedi CM, Juhr D, Gupta M, Cui Z, Tian Y, Zhang Y, Yang W, Gruber PJ, Epstein JA, Morrisey EE.
! b2 m9 Y2 d3 M" M. I- W: V& KSource5 k6 [. E( h4 \! O
Department of Medicine, University of Pennsylvania, Philadelphia, PA 19104, USA.

hualin840518

回复 hualin840518 的帖子
+ E( ~" \' i- t- o4 Z' v+ e) l' Q- J" g
JBC：miRNA簇在提高诱导干细胞（IPS）诱导效率中的重要作用
) |% U8 p6 ?, I  Npdf全文

hualin840518

回复 hualin840518 的帖子
, d) f  {+ E& w1 g) D" c8 {5 f( A6 l# d; x+ L
JBC：miRNA簇在提高诱导干细胞（IPS）诱导效率中的重要作用
9 ^! Q7 `. h' D9 D; I( M! Y中国科学院广州生物医药与健康研究院利用锐博生物（Ribobio）的miR-RiboTM antagomir、Bulge loopTM miRNA qPCR primer产品在诱导干细胞研究中获得重要发现，在小鼠成纤细胞（MEF）中分别过表达两个miRNA cluster（106a-363簇及302-367簇）显著提高了三因子（Sox2、Klf4、Oct4）诱导iPS的诱导效率。该文章发表于最新一期的JBC杂志上。* u" A, J3 R8 u0 M& t. r) ^
6 k9 }3 `6 Z0 I" w) T$ ~
该文章用锐博生物的Bulge loopTM miRNA qRT-PCR primer set 定量检测miRNA 的表达，发现两个miRNA簇在小鼠胚胎干细胞（ESC）中的表达显著高于MEF细胞；该两个miRNA簇的成员在4因子诱导的iPS细胞中的表达显著高于三因子诱导的iPS细胞。& P% N. I6 ?8 \
& C* K, V* y9 q$ G) r8 b5 p! R2 H
该文章进一步用锐博生物的miRNA抑制剂miR-RiboTM antagomir分别抑制两个miRNA簇的各个成员，发现单个miRNA在提高iPS形成效率过程中发挥的作用不同（见下图）。; z1 n8 l0 L0 y6 a
, n% ^  h. G; k' G% _7 E. x! o& V9 A. }7 J
这项研究揭示了提高iPS诱导效率的新方法，并且miRNA作为内源存在的分子，以miRNA的作用部分替代四因子中的c-Myc将有助于iPS早日进入临床应用。0 p. \0 j# I7 U* B8 ?* ^
2 u* R6 z# P- |4 A4 i0 ]& i
中国科学院广州生物医药与健康研究院裴端卿院长实验室是国内首个成功诱导iPS的实验室之一，且该实验室首次发现维生素C（Vc）可显著提高iPS的诱导效率（Cell Stem Cell， 封面文章）。
8 I2 A9 l0 `) S4 {& {% l; f) o锐博生物的siRNA、miRNA相关产品已经在国内中科院、北京大学、清华大学、复旦大学等多个科研院广泛应用，使用这些产品发表的科研论文有几百篇（SCI收录），并正在不断增长，该文章的发表又一次证明锐博生物的产品获得了国际一流生物学家的认可！
* D+ w# B) W) v2 Y3 [: e& m3 }
: b- P) f7 V1 E
4 \% ~/ |9 f- @7 n4 G- P; MJ. Biol. Chem. 2011 IN press
/ ^# D3 A9 s: \+ f2 KMicrorna cluster 302-367 enhances somatic cell reprogramming by accelerating a mesenchymal-to-epithelial transition: J4 c; C9 y0 i1 M) M5 [; Q! g
Baojian Liao1,2,*, Xichen Bao1,2,3,*, Longqi Liu1, Shipeng Feng3, Athanasios Zovoilis4, Wenbo Liu1, Yanting Xue1,2, Jie Cai1, Xiangpeng Guo1, Baoming Qin1, Ruosi Zhang5, Jiayan Wu5, Liangxue Lai1, Maikun Teng2, Liwen Niu2, Biliang Zhang3,&, Miguel A. Esteban1,&, Duanqing Pei1

wys7416

楼主少了个microRNA诱导iPS的形成，cell stem cell，4月9日发表的

hualin840518

回复 hualin840518 的帖子
1 H( f- O: ]! a5 q7 X% x: r! n; C% }9 U
希望大家对这个帖子继续补充完善!

hualin840518

* s- B, ~1 @  w2 p
7 A$ w- z; H( I$ @" b7 \$ @
回复 hualin840518 的帖子2 K# O9 T' M9 f2 f- ^. P$ r

( w* _7 ^. h0 k1 C) i* H. R6篇原文全部搞定, M9 z/ t9 m( A; ^  R# t6 r5 F
希望对大家有用!/ ^/ c4 H7 }  a9 D* ~; m9 y" ~8 @
3 `! ?* }, _5 M4 d. I" x: {5 D
补充内容 (2011-5-5 21:44):
! i) `( I. \% Y5 W8 t# _0 P+ n见第13楼，16楼5 `! W! R& D$ @/ s; u
补充内容 (2011-5-4 12:37):8 j$ s, I, R6 p1 g9 U& W- D* s6 w
JBC：miRNA簇在提高诱导干细胞（IPS）诱导效率中的重要作用
# t- c/ R% Y6 ]  _
$ u) K8 N9 W  |, C' y补充内容 (2011-5-4 12:45):, v3 Y: b/ ^# J9 \6 D
Cell Stem Cell：microRNA诱导iPS的形成- z2 ^! `2 t3 D
这两个研究的PDF全文！