全骨髓培养法比较简单，但是细胞比较杂，需要经过3代左右才能纯化。密度梯度离心法细胞比较纯，状态也比较好，所以本人推荐后者。原代的培养的时候尽量不要去动它，培养2-3天左右再换液。原代的骨髓见充值细胞是呈集落生长的，细胞是纤维状的，排列得比较整齐，传代之后能均匀生长了，但是前2代生长比较缓慢，不要着急，一般7天左右传第一代。一般在3代左右就可以保种了，这个时候的细胞状态比较好，然而这种细胞比较容易衰老，培养条件掌握的好的话能传8-10代，但是一般就在6-7代的时候就衰老了，细胞生长缓慢，S-A-β-Gal染色阳性率很高，所以还是早点保种或者重新原代。我听人说间充质细胞对温度比较敏感，这个我也不是很确定，但还是注意点比较好。骨髓见充值干细胞是比较大的，展开后很薄，相差显微镜下也没什么立体感，厚度在就10um以下，还是比较容易辨认的。4 e/ X3 ^+ v q o
培养基用的是DMEM低糖，加10%的进口小牛血清，用之前先在培养箱中平衡一下。: r1 b! n6 F2 B
图下次再传，祝你好运！！
发表于 2011-5-9 15:44
