脐带间充质干细胞培养问题，请各位赐教

topling

最近培养的间充质干细胞经过传代后状态还不错，颜色很深，在倒置显微镜下看呈黑色。但是当细胞长满后发现细胞颜色变的暗淡无光，呈灰白色，细胞状态也发生改变细胞边缘编的不光滑，细胞面积拉大，有点像纱巾一样，朦朦胧胧的感觉。希望有经验的高手赐教！

细胞海洋

建议上图

taoqilh

我知道你出现的这种情况，应该是间充质细胞老化了，细胞由原来的立体变的扁平，我在培养的过程中一般原代形态好，传代后就不好了，建议第一次传代密度大点，同时，在培养液中加生长因子

gaorongbest

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2 f( r! K& g7 ^/ D' C/ s
) g! x0 ]' R, V; r: _一般加什么生长因子呢？我也存在这样的问题，细胞很容易变老，不好看了，希望你指点一下啊，谢谢啦

柏林小杨

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! o7 Q9 `2 j( o
% q" W5 \; a- Y, ~9 Q! j你是第几代的细胞，用什么培养基养的？
1 V, h) B  g; S6 n+ `* F

taoqilh

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4 l2 C1 ]( p! r
5 {" z& w; ~1 j% P: D我们一般都加EGF和bFGF

topling

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' ?8 z4 q3 d) R
! |% B0 |9 R/ X$ ~; l7 p所有细胞都是3代以内的。今天又出问题了，染菌。头都大了，那种菌比较奇怪，40倍下动的幅度不大，想这段的木棍一样，呈钝角，聚集成一团，满视野都是，奇怪的就是培养液颜色正常且不浑浊。

topling

回复 gaorongbest 的帖子) U1 z& i" g% m6 D- L; c: L
4 H( U8 B1 ?/ l
因子都加EGF的

topling

回复 taoqilh 的帖子! F: v. N0 |- o" A
$ ?$ C* I  x6 b0 R$ d9 m9 @$ c
我传代的时候都加EGF，从第一次原代细胞换液开始就是加了因子的，当细胞没有长满的时候状态非常漂亮，一旦长的快满的时候一夜之间状态就变了，很头疼，会不会是换液间隔时间太长了，我们一般3天换液。

福牛

干细胞老化的表现：
7 M9 J& I% a1 K! y* z) g1.细胞胞浆内特别是在核区附近出现黑色颗粒，表示细胞开始出现老化； ! I0 K" o% f( _& J& a3 i. o
2.细胞胞浆内出现空泡，则表明该细胞已老化或者已经开始分化（在全部细胞中出现少数老化细胞是正常的）； * X9 R! q: f# e6 U( d8 f' k
3.细胞立体感逐渐消失，细胞间的间隔不清，部分细胞扁平状，细胞的形状趋向多样； ; _+ z" x! Y% ?' k0 v* K% w( a
4.贴壁性减退，出现一些漂浮的细胞； / Q1 W' s& o( `& C
5.部分分泌强的细胞分泌物增多，细胞表面会比较脏； % e1 L  R/ A6 M9 [/ `& K2 B6 ?
6.细胞增殖速度明显下降，分裂相的细胞明显减少。+ n+ r1 S6 i: A+ `$ Z% p5 j' p