请教如果用胶原酶4消化IPS时MEF细胞也一块消化下来，不就影响实验结果了吗？

mike19840320

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' U4 A5 c) h: E* X2 l' \; n% z如果用胶原酶4消化IPS时MEF细胞也一块消化下来，不就影响实验结果了吗？

mike19840320

MEF不是应该在3代以内做滋养层最好吗，是不是MEF可以提前用丝裂霉素处理了，然后冻存起来，传代前直接拿出来铺板？

christophe

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MEF贴壁的速度比ips细胞快，因此可以用差速贴壁法将feeder去除掉。具体就是ips和MEF一起消化了以后在gelatin包被的皿中贴壁30min-60min左右，MEF贴壁，而ips则大部分出于悬浮状态（MEF和ips细胞大小不一样，很容易区分），这样就可以得到比较纯的ips细胞了。如果只是传代的话，则没有必要除去feeder。

christophe

写错了，不是60h，是60min

ljs

是不是酶的原因？胶原酶4用久了就失效了。胶原酶从冰箱里取出来后在室温放一会再用，效果很好。如果只用一次，就放入37度，效果非常好。缺点是用后就废了。换个批次的酶，做个对比试验就知道了

前途似锦

回复 christophe 的帖子* S  @0 k; t9 e0 v' o! ^) P% s( j% b

/ D2 T1 S4 T) \% O6 ?差速贴壁不用很长的时间吧  1个小时ips会聚成小团块吧  我觉得不要超过半个小时

iamcyy1224

可以稍微消化长一点 15分钟后拍一拍 克隆就掉下来了 可以在显微镜下把这些克隆吸出来再传代 就可以去除MEF了

牙牙丫丫123

不会影响实验结果的，因为消化下来的这些feeder会在后期调往掉，状态好的feeder有一部分还会再贴壁生长，或者可以用0.1%明胶贴30min左右就可以把一部分feeder贴下来

mike19840320

谢谢指教