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请教如果用胶原酶4消化IPS时MEF细胞也一块消化下来,不就影响实验结果了吗? [复制链接]

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楼主
发表于 2011-5-18 17:22 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 细胞海洋 于 2011-5-18 19:14 编辑
# g+ }" w/ `  h+ }, Y$ |
# y  O2 A" Y" v3 d$ i+ F# O如果用胶原酶4消化IPS时MEF细胞也一块消化下来,不就影响实验结果了吗?
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沙发
发表于 2011-5-18 17:45 |只看该作者

请教

MEF不是应该在3代以内做滋养层最好吗,是不是MEF可以提前用丝裂霉素处理了,然后冻存起来,传代前直接拿出来铺板?

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藤椅
发表于 2011-5-18 19:08 |只看该作者
本帖最后由 细胞海洋 于 2011-5-18 19:24 编辑
9 I6 Z' J! V: W
9 j2 O4 \0 U( PMEF贴壁的速度比ips细胞快,因此可以用差速贴壁法将feeder去除掉。具体就是ips和MEF一起消化了以后在gelatin包被的皿中贴壁30min-60min左右,MEF贴壁,而ips则大部分出于悬浮状态(MEF和ips细胞大小不一样,很容易区分),这样就可以得到比较纯的ips细胞了。如果只是传代的话,则没有必要除去feeder。
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板凳
发表于 2011-5-18 19:09 |只看该作者
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写错了,不是60h,是60min

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报纸
发表于 2011-5-18 20:36 |只看该作者
是不是酶的原因?胶原酶4用久了就失效了。胶原酶从冰箱里取出来后在室温放一会再用,效果很好。如果只用一次,就放入37度,效果非常好。缺点是用后就废了。换个批次的酶,做个对比试验就知道了
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地板
发表于 2011-5-19 00:15 |只看该作者
回复 christophe 的帖子% R! g/ n+ ^- l' ?9 Q

" W' k- W2 J  R/ l6 L差速贴壁不用很长的时间吧  1个小时ips会聚成小团块吧  我觉得不要超过半个小时
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发表于 2011-5-19 11:36 |只看该作者
可以稍微消化长一点 15分钟后拍一拍 克隆就掉下来了 可以在显微镜下把这些克隆吸出来再传代 就可以去除MEF了
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发表于 2011-5-19 12:48 |只看该作者
不会影响实验结果的,因为消化下来的这些feeder会在后期调往掉,状态好的feeder有一部分还会再贴壁生长,或者可以用0.1%明胶贴30min左右就可以把一部分feeder贴下来
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发表于 2011-5-19 15:52 |只看该作者
谢谢指教
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