流式检测干细胞分离效果

xjhou17011

最近想检测一下实验室分的干细胞纯度，用流式，检测CD34和CD105有亲做过给个protocol吧，还有大概抗体要多少钱啊。

xjhou17011

我查到BD有个kit,是直接可以检测的，里面还有个control，不知道是怎么用的。好像可以直标的，不用2抗了。" }2 R6 A  F4 i0 U
1 W6 Y& A- ]2 M7 n
so
. {; G, @0 _1 R: _  t/ P* T3 M骨髓中单个核细胞分离后取106和CD34抗体孵育30min，PBS洗涤，上机检测
3 p/ r+ F% y5 {4 W6 R9 k5 k' |对照：用PBS么？
" w9 x5 l) O( M5 l另外：分离前的细胞中CD34细胞怎么检测啊？好确定分离的效率。: j3 \% j* o+ a9 A& I
要不要裂解红细胞？怎么算呢？( ^. J" [! ]- e7 }

% n( n2 h0 X2 B3 @

jhu132llh

一抗大约是2000-4000- E( @$ }4 K, L4 x. j3 D
二抗就用国产的吧. B5 R2 t* l- H1 x3 K" g
效果也很好的
6 D) E- v& n5 e: o! z( S2 S7 K大约5、600的样子
# Z: i0 S7 z' \, K, u: ^不贵的& @# l/ o% \8 i) D' L' k: p( Y# `1 j

6 a( b0 j) x% L# _$ @3 H- O" L6 e/ D流式分选的话书上的方法已经很成熟了
2 P9 @0 L# [: I# N$ K) C好好看看书就可以的了
7 L/ p0 M3 ]+ J* r无外乎就是几步：- u" r5 n- w( `7 Z; K
1.收集细胞
% X$ z& {+ x% p$ w2 Y% O0 K% q2.洗去血清成分
# ]" R; b5 n4 T! l3.一抗孵育，洗涤
  c9 @: P. m- P9 F2 b. c1 a6 y4.二抗孵育，洗涤( ?3 b! n) N; G& Y1 c# n. B# {; T
5.第二个抗体的一抗孵育，洗涤
. r, U1 T- r' [0 Y6.第二个抗体的二抗孵育，洗涤（如果不发生免疫反应的话，2个抗体的一抗二抗可以混在一块加上，节约时间而且减少细胞的损失）# l4 d1 ?# P+ R2 h+ m
7.上机检测分选
4 q: X) U' }0 P9 E6 N2 f* C8.结果分析

xjhou17011

哎没有我想要的答案啊

xiaogao

没有做过流式分选，帮顶！' t6 \* B; Q* \
ps：听说流式会对干细胞有影响，不知道是不是这样的？？有什么样的影响？？