feeder-free mouse ES cells 培养

zhenhua

大家来看看我养的AB2.2 mouse ES cells，feeder-free的。: A- v2 V7 ~: i* e+ f' A$ k3 u' G
形态有点怪，是分化了吗？
4 ]  R! f. K+ n2 w( z$ j

subenjinwo

版主，我感觉feeder的形状都已经变形，老化得成碎片了呢。建议另外提MEF原代。

zhenhua

回复 subenjinwo 的帖子
0 I3 @$ }. j% E- x
. [/ X7 u1 X6 q: v啊！！！我这个是feeder-free的。。。。

yeya

楼主的细胞是有些散了，但是边缘还是比较整齐的，而且挺亮的。不知道养了多久了，feeder-free的ES一半传代几次以后就有些散了。

minshuyin

一般FEEDER-FREE要加一些抑制分化的因子才能保持它的克隆形态。" r+ m! e6 c. d( D$ y$ B& K8 ~. U
比如说bFGF等。可以尝试一下。

dilal

你的mESC基本上都分化了，形状不规则，呈条索状或者分叉，细胞遮光性差，胞核明显。建议你重新复苏培养。$ B( K2 V/ V+ T$ x  s: S# v' ^
以下是常见的ESC分化的征象，可供参考：5 g/ d' k7 l) q) _2 A4 x
a)        细胞集落被不同形态的扁平细胞所包绕，集落边缘的细胞往往遮光性差、形状锐利；. u# N/ [, @- o* N
b)        集落中心出现坏死中心，边缘界限清楚——未及时传代；& w2 g" k2 Z7 D: J( o' r
c)        集落呈单个细胞，而非细胞团块，分化细胞的细胞核往往很明显；3 Y9 M' P8 b& C/ y
d)        扁平集落呈现出单细胞层，为类圆形边缘包绕。; v  g" c$ Z! W8 T- s
我们feeder-free培养的mESC细胞最近也状态不好，常常分化，还望高手多多指点。

zhenhua

3 {# M; p; y& y/ n

/ j. j# f8 l: R: k回复 dilal 的帖子  X8 u( M" J: m* b/ @- ?5 |
% n. m1 `  y0 @# i9 p
谢谢！我们实验室的其他同学说LIF可以多加一倍，特别是放了较久得LIF。还有Gelatin处理培养皿久一点。

xiaogao

回复 zhenhua 的帖子% ^$ @* _( Y: I

8 d, M9 _- J7 N+ a5 lfeeder-free不是一般用matrigel处理吗？？还有分化跟这个处理的时间长短有关系吗？？0 d/ G6 ?* ]6 f+ V- ~
2 k( }* H; Q9 P5 _

zpzp0312

你这是从饲养层到matrigel后第几次传代？  A5 J* v3 y1 f$ h
通常第一代还能维持集落状态，第二代就勉强了，或者第二代就像你这种状态4 }( L) n( ^/ B. E
我们也养过feeder-free ES cells，说是在明胶上即可生长，但事实上明胶不好用
' k8 j/ Q/ A) }( f! J后来使用matrigel，也不怎么样
5 |$ r4 E* K; X" _! p: @7 W但如果仅仅为了去除饲养层，matrigel一代也还可以，大部分饲养层就没有了
7 F$ ?$ z  B+ K4 p2 m1 Q( z连续培养，外观感觉状态不好7 I( X$ U: F$ x8 V8 p# Q
但传回饲养层还是能够形成集落的
, v4 g4 H+ \) i! R/ V所以，最后我们还是选择使用饲养层了

chliu

楼主的细胞铺的太散了，小集落的地方看似还可以，单个散落的细胞肯定是不好了。