如何浓缩慢病毒？

sizhengliu

我要做慢病毒转染，现在想自己来浓缩慢病毒，看了一些资料，发现病毒浓度不高，浓缩是一个关键问题。我在的实验室有4度离心机，目前我还没有买任何试剂。请有经验的朋友路过指教，我怎样比较有效率的浓缩慢病毒？还需要什么东西呢？不胜感激！！

daviddow

超速离心，大约32000rpm，3个小时

sizhengliu

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4 J' l6 Z5 C& s5 ~' t- I: w2 a
9 ?# V1 M2 n2 {, T% l谢谢！用你的方法，你能得到的滴度一般是多少呢？

huangcong1988

  病毒的收获及浓缩& A8 ?7 {$ |9 l) N' v1 S
（1)收集转染后48h（转染即可为0h计起）的293T细胞上清液。
. f- d1 U8 Y9 @* ^（2)于4℃，4000g离心10 min，除去细胞碎片。
  P! a) S. t  P8 {* ^. X$ D% y9 R6 b（3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。
9 b/ v2 {- K; t) a. _2 H（4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中（最多19 ml），盖上盖子。将过滤杯插
3 E% N& ?, x& G, m3 C: y到滤过液收集管中。
3 ~2 t9 P, n3 ?+ k5 x（5)组合好后，做好平衡，放在转头上。
& C4 H0 a! ]* p$ r& V  O（6)在4000g离心，至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。8 l) _* i7 _$ m& \: v+ x) ?
（7)离心结束后，取出离心装置，将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。7 k. i$ [8 B0 l8 k
（8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。7 P* t/ h; i6 A: |
（9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从1 Q/ U* W: e& v; x6 t
样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。: Z( ~, F: u1 a2 z
（10)将病毒浓缩液移出，分装后保存在病毒管中，-70℃长期保存。取其中一支+ E* T! D1 q3 U* m; F! j- a
进行病毒生物学滴度测定。* \  H6 S1 N5 @1 k( X! x

shihuijunm

超滤管就可以，但滤膜是100k的，Millipore的有卖

daviddow

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8 l) f8 D  w- r( N& X$ c1 g: @& ?+ ^& p3 J+ G, {! q
过滤杯是在哪里买的？还有收集管？谢谢

huangcong1988

回复 daviddow 的帖子1 F' W# l' {; j, `) o# X
* D5 C! u. |1 U' D
在一般的试剂耗材公司应该都能买到

daviddow

回复 huangcong1988 的帖子2 I4 N8 b( m1 @5 V: Z9 T+ ?

& R& `* x6 C1 u9 O4 m, S/ o% o国内的公司有吗？价格

huangcong1988

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4 N9 h2 N6 g8 z# y) [" T5 D* i) x4 X/ Y( h( ]
这个不提清楚，呵呵，应该是不贵，耗材

wangyimei

如果有条件可以用BECMAN低温超高度离心机，26000rpm 2hours ,然后倒掉离心上清，可看到白色的病毒沉淀，再用PBS重悬