请教组织块如何很好地贴壁

lyrsea

我们实验室第一次做时，脐带组织没有湿润，再切碎的过程中组织块变得干巴巴的，倒置半小时后，加入培养基，没有漂移，可是过了一个礼拜，没有细胞爬出，大概切的过程，细胞已脱水死了，第二次用消化后的组织块，用盐水冲洗后再次切碎贴壁，倒置2h后，加入少量的培养基，第三天看时有一大半的组织漂浮了。

death0270

回复 liucong 的帖子
. P4 p/ ~3 ^8 |* `" r+ j: N  _. _+ d( M1 K; a
发现有少量细胞出来了就可以加培养基了，或者8天以后也可以加了。

aibi1983

我们实验室在做脐带组织块法都是不倒置的，只需要将脐带胶样组织剪成0.5*0.5cm小块，大一点也没关系。然后PBS洗几遍，把胶样物质冲掉，然后均匀铺到皿底，先不放培养基在实验台静置5-10分钟，后轻轻加培养基不要没过组织块就放到培养箱。大概5-8天后才会看到少量细胞爬出，一般十几天后才可以传代。

xylophone

回复 大少爷 的帖子* ?8 ~$ ?9 v$ g
; c6 }2 ~( N3 U( }" E4 u8 _
你好，看到你这个回帖：“我们实验室做脐带组织块时，先将其剪成1mm3左右的碎块，然后按重量接种，75cm2培养瓶，每瓶0.5g，加10ml培养基摇匀，静置培养，组织块贴壁效果较好。因为10ml培养基刚好可以覆盖整个瓶底，又不会太多，小组之快会很块贴壁”
8 y3 H7 ]6 U6 d, l- x: }
+ A, N! n( M: P* k& ^3 s1 x我初来做这个课题，请问你什么培养基，加什么因子啊？谢谢

透明之蓝

回复 cactus006 的帖子) \0 E+ @! p9 b
" c  f, @' |- }* h5 [$ j# e2 R8 L1 t
没那么快，做好2周的准备吧~~有的确实快，但是和脐带自身关系很大！

ld2069

新鲜脐带组织一般一周左右就可以爬出了，贴壁前先湿润培养瓶，T75加1.5-2ml,组织剪成小块后直接贴壁，注意处理脐带时需要用少量PBS湿润剪切。以后每天补液1-2ml。

huajie881026

cactus006 发表于 2011-6-18 08:59 9 P5 u; H% \2 j5 N0 C
回复 chb611301 的帖子
6 V9 }$ \) K4 W! c  A
8 W( i, f. g) T  L/ q  x我用10cm的皿，每个皿只加2--3ml培养基，次日补液，大部分组织能贴壁；但是到现在已 ...

! G! j1 E- W/ ^7 I' o' t5 i' N
5天还太早，可以再等等，一般7天会看到少量MSC，10天左右会多点！1 A& I" t: f$ k1 V, A
贴壁法的确是比较慢的

quge_00

回复 cactus006 的帖子
# n# O0 u+ D$ f# E2 H1 f2 ^! b
我的一般要2周左右才看见细胞，耐性等等~
) r  {( m6 \5 b8 p2 r4 V脐带也有个体差异吧~~

quge_00

回复 cactus006 的帖子
. O) n$ x5 q& q# p! I' i( b: g3 S, M% L1 P3 B$ S
我的细胞一般都两周左右才长出来呢~耐性等等。

liucong

回复 death0270 的帖子6 g0 g/ Q$ `( L8 K

8 X  M' z4 O  p2 I9 K) @( _请问，培养过程中始终保持培养瓶中的培养基为1ml吗？