请教~天花板培养法大概是个什么情况？

4445655

颈椎脱臼法处死大鼠，75％酒精冲洗全身进行消毒，无菌环境下取大鼠附睾周围的白色脂肪组织，无菌含双抗PBS冲洗3遍，解剖显微镜下用眼科剪小心剔除组织中的血管，反复剪切组织1 min至组织变得细碎，无法再剪切为止。用吸管吸去周围水分后，把组织吸取入培养瓶中，均匀铺于培养瓶底部，组织间距小于0．25 cm，轻轻将培养瓶翻转，让瓶底朝上，加入适量DMEM培养基，盖好瓶盖，将培养瓶倾斜放置于37℃培养箱中（培养瓶口处用培养板支撑，以防培养基流至瓶口，避免污染），4 h后慢慢将培养瓶翻转平放于培养箱中。
8 q4 S  d8 j& r) h# T; L- U请问倒着培养四小时细胞不会脱水死吗？后来又把培养瓶放正请问开始倒置有什么好处？

bllx58

培养基会蒸发上去的，不会死，放心啦，就是过夜都没问题，你可以试试，我试过
, [% C! v2 Q1 o; ]
9 k  k* Y' u/ e+ @  H4 W; E2 o刚开始倒置是为了帮助细胞贴壁' z1 F' b  K/ n6 a

deron

原来这叫做天花板培养啊~组织都是用水冲洗过的，倒置的作用是让残留的水有充分的时间流下，使贴壁更牢固。楼上说的很对，过夜都没有问题。

baichunyu

开始还以为什么神奇的培养方法，就是组织块贴壁法啊！请问楼主你培养的是什么细胞？

4445655

脂肪干细胞

zerollx

天花板培养法是针对于脂肪细胞的一种培养方法，而非脂肪干细胞。其培养方式主要就是为了解决脂肪细胞在培养液中漂浮不会沉底从而无法贴壁生长的一种培养方法。其具体操作方式是将分离得到的成熟脂肪细胞置于培养瓶中培养，但是培养瓶中的培养液要加满，再倒扣，此时脂肪细胞因受浮力而漂浮在上面，即倒扣后的皿底，待其充分贴壁后再弃去多余的培养液再正置培养。楼上的解释只是普通的组织块倒扣培养法，而非经典的天花板培养法的真正含义！对于脂肪干细胞，你用的貌似是传统的组织块培养法，此法很不明智！理由有三：1、我只用过胶原酶消化法而没用过组织块法，但是我想多余的成熟脂肪细胞肯定会影响其贴壁效率，因为脂肪干细胞为成熟脂肪细胞所包裹，仅仅的剪碎是去不掉成熟脂肪细胞的，直接影响了脂肪干细胞的贴壁与后期的增殖，即使得到脂肪干，其效率也会大大降低。2、不利于脂肪干细胞干性的维持：且不说此法能否得到脂肪干，即使得到，必定也有很多成熟脂肪细胞贴壁生长，在猪的脂肪干中有文献报道过，脂肪干细胞与成熟脂肪细胞共培养会诱导脂肪干细胞的成脂分化，不利于其干性的维持。3、影响细胞的纯度：这里指的不是成熟脂肪细胞，因为其一般在12~14天后脂滴就会破裂且传代后就不会有了，所以多次传代即可将其去除。我用胶原酶消化完之后，都必须用尼龙网过滤的，因为其中还有很多的杂质组织块胶原酶消化不了的，过滤在一定程度上保证其纯度，此消化不了的组织块主要是分离时附带的系膜结构和血管的内皮（我们能做的只是去除眼见的明显的大血管，很多小血管是去不干净的），若直接组织块法培养这些杂细胞的比例会加大的，影响脂肪干的纯度。

臭蛋家宝贝儿

楼上说的很全面~学习啦！

biocyclin

很好的资料

nakice

学习了

meister

不错，是这样的，脂肪干细胞不适合贴壁法