求助核型操作

yulinmufeng92

用山羊胎儿成纤维细胞做核型，一直没做出来，请各位帮帮忙。我的条件是秋水仙素0.2ug/ml处理2h，0.075M KCl37℃低渗20min，室温固定3次，每次10min。滴片高度为50cm，染色20min。

dxb1985

回复 yulinmufeng92 的帖子1 C9 C/ U7 C; v) v" e/ h

9 N$ w0 T' h3 k: E# N8 m) s条件基本没有问题，是没有观察到分裂相吗？

yulinmufeng92

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6 a# ?8 |! C# \/ I+ f1 K5 K* T, Q9 {; U% O& a
是，细胞好像就没有摔开+ t3 n; m+ c' }& g' @

dxb1985

操作过程中如果觉得细胞数量减少很多，建议减少低渗时间，同时手法要轻柔，如果细胞数量变化不大，建议增加低渗时间。还有固定液，要新配置的，细胞固定是最好在低温条件。还有最好固定过夜，第二天重固定，离心，底片。

langziforever

细胞如果没摔开，应该主要还是低渗条件的原因！从这方面考虑优化一下条件吧！

ydj19830

建议增加细胞浓度、增加低渗时间，滴片之后再滴加一滴新配置的固定液，再在火焰上稍微烤一下，之后再染色...