MSC在-20°冻久了还能用吗？

mason658616

今天冻细胞，4°放了1h，放到-20°就忘了，大概有4-5个小时，然后赶紧放到-80°。我的细胞是不是不能要了？
; I: i. f* _# r& x另外请教MSC冻存每个步骤需要多长时间，比如4°、-20°最长最短需要多久？在-80°能保存多久？因为实验室液氮罐有限，一些细胞进不了液氮。。。

若兰汀

我个人觉得影响不大，之所以一步一步冻存，是因为冻存过程要求程序冻存，缓慢降温有利于细胞存活，对于每一步具体放置多久本身就存在很多争议。一般我是四度半小时，负二十两小时，负八十过夜，液氮永久冻存。不过我试过负八十冻存三个月没问题，细胞活力尚好。实在没有液氮，细胞能在负八十放两三个月没问题，关键有三点:首先你的细胞活力要好，其次要保证密度，最后在负八十内要保持温度稳定，如果有人经常开冰箱门，我建议你放进液氮。实在担心，你就复苏一株细胞看看究竟怎样啦，祝你好运

sdwzg119

够呛了吧，一般我们都直接仍80冰箱的，复苏下看看呗！

eley

没事的，只是一个梯度问题，只要最后放到-80就可以了~~

皮搋子

建议使用程序性降温仪。
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一般来说，-70度之前每分钟降温一度是最好的选择。过快的话细胞脱水不充分，过慢的话形成冰晶损伤细胞。1 ]6 n( o5 @- t
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复苏一个看看成活率就ok

皮搋子

建议使用程序性降温仪。
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一般来说，-70度之前每分钟降温一度是最好的选择。过快的话细胞脱水不充分，过慢的话形成冰晶损伤细胞。
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复苏一个看看成活率就ok

linchee

我们甚至就直接放-80，一直那样放着，然后拿出来复苏，影响也不是很大呢

huangcong1988

还是梯度比较好，一般实验室都有4度，负20，负40，跟负80吧？你可以一步一步来，最后放在负80或者直接放到液氮罐中最好，但是时间放久了还是不好，一般半年以后就肯定不行了

huangcong1988

负20放4,5个小时应该也没什么，但是放负20最好一个半或者两个小时就够了，早点放负40，然后负80

mason658616

回复 若兰汀 的帖子
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多谢！看了下大家的意见不尽相同啊，我也觉得程序降温更好，密度在10*6~10*7可以吗？