伯乐Bio-rad的半干转仪，做WB时不同分子量的转膜条件

mayansen1314

我们用得是恒压转，电压电流要跟你的胶，膜面积有关，一般胶面积比较小的话我们用10~15v，时间20~30min，较大膜面积的时候我们用15~25v，转膜时间30min~1h，蛋白分子量大小只要不是非常大（过百）问题都不大。我最近做的wb都用湿转，转膜效率更高些

mayansen1314

还有，转完膜之后的胶染色出现条带很正常，尤其是分子量大的蛋白肯定比分子量小的更难转到膜上。只要你最后一步压片结果好那就好，祝好运。WB这东西很可恶的，我都做了两个月但我这边的条件还是没摸索好，非常不稳定时好时坏的

mayansen1314

回复 张也行 的帖子
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半干转跟湿转都是比较成熟的两种转膜方法，各有千秋。个人认为，时间是两者最大的差别：一般较小蛋白用半干转更方便些，大大节约转膜时间并且能达到满意效果；但是对于较大分子量蛋白，干转的话需要较长时间，这就加大了烧胶的问题，所以一般较大分子蛋白都是湿转，虽然需要更长时间但不会出现烧胶情况。看论坛时有人也用过低压过夜湿转，听说效果也很好，可以想象