抽RNA遇到的问题求助

sun_happone

最近抽RNA,抽完之后测RNA浓度，结果发现浓度只有70ng/ul，我抽的是六孔板的一个孔，以前测浓度都有800-900ng，这次浓度出奇的低，结果同学说可能是异丙醇不好，想请问异丙醇有质量问题，会影响抽提的RNA的浓度吗，请高手解答，谢谢。。

zxcv12345

回复 sun_happone 的帖子- E7 V% p8 n' ?* q

8 g5 n# U7 ?' V" \/ b4 u  S  Z异丙醇的可能性不大，最有可能的是在倒掉异丙醇或70%乙醇溶液时，RNA 沉淀会跟着丢失。, w  e, Q- i% {) \8 v0 E
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sun_happone

那还有别的影响mRNA浓度的因素吗？

amosummer

一次不好说明问题，谁知道是不是操作过程中出现问题而自己没注意呢？所以，再做一次，就知道是试剂问题，还是自己的问题了。

siyue13

换

tangyvhuang

异丙醇只是一方面吧，但是要是说异丙醇质量问题有点不合适，这个要看你细胞的密度，抽提时的作用是不是充分，异丙醇沉淀时间够不够，必要时候可以零下20度半小时以上。洗沉淀的时候是不是完全溶解了别丢了

pla269

如果你的技术稳定的话，加入异丙醇会出现浑浊，你可以根据浑浊的程度，初步判断一下影响程度

chenks

最好把所有的试剂都换成新的,再试试.
0 {7 f& i6 ^; ^另外,你看了你的细胞长得怎么样了吗,是不是长满了.同样是六孔板一个孔,细胞数可能不一样

hndxws

会的

mayansen1314

异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受到保护，达到沉淀核酸的目的，异丙醇质量不好直接影响总RNA浓度，建议你重新提取一次，注意操作：加trizol，氯仿之后吸取或弃去的上清沉淀等等问题