求解神经球消化后无法成球

chinagdweiwei

神经干细胞聚集成球状后，消化成单细胞悬液，培养了一周，仍然是单个细胞是生长，未形成集落。神经干细胞不是可以传代的吗？

yuande

我是初学者，之前没有养过神经干细胞，但是我觉得如果是神经球传代的话，可以先将其吸到离心管，它应该会自然沉降，之后再用PBS洗，弃上清，中间不用离心吧，之后加酶消化终止，最后再离心去掉上清，这样只离心一次，可能对细胞的损害会小一些，这只是我个人想法，请高人指教。

yuande

我是初学者，之前没有养过神经干细胞，但是我觉得如果是神经球传代的话，可以先将其吸到离心管，它应该会自然沉降，之后再用PBS洗，弃上清，中间不用离心吧，之后加酶消化终止，最后再离心去掉上清，这样只离心一次，可能对细胞的损害会小一些，这只是我个人想法，请高人指教。

jfy505

回复 bin 的帖子
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/ b* t: H2 F# I* k% W6 p直接吹打也能成球的，不过要控制好吹打力度跟次数，最好不要有气泡产生。仅仅靠吹打和用accutase酶消化，我都试过，都能成球。两种方法各有利弊吧，单纯机械吹打的，培养后发现细胞碎片比较多，而酶消化的 培养后观察瓶底背景比较干净，但要多次离心，细胞损失比较大一点。

bin

回复 jfy505 的帖子" e5 [" Y. h9 o  e2 ?. G

2 y9 Q3 D7 D" ^7 J) y) V/ C细胞球传代也要用酶消化吗？仅仅靠吹打不能吹开吗？

ycjzyh

我想问一下你这个细胞球是怎么挑出来的呢？

chinagdweiwei

谢谢
# ^+ Z+ a! y; E& m我是先离心去掉上清，加入胰酶，吹打后在培养箱中孵育3-4min ，然后再离心，去胰酶----加入培养基吹打后种板。$ G! a# @8 Z$ l! O
至于细胞密度，我也考虑过是因为种板的细胞密度过小，导致细胞无法成球，甚至死亡。可是反复试过几次，都还是失败。
+ M" O1 l0 X1 e. E; O0 ]! d

cyumin123

楼主说一下你的传代方法，大家可以讨论一下的。传代的话注意细胞的消化时间和接种密度，我觉得你是不是消化时间过长了。

conanthird

同样的问题，不过是别的细胞系。我是用的accutase消化的四个细胞球，然后接种到六孔板的。可能接种的细胞密度太低的缘故吧。

jfy505

神经干细胞球一般是能传代的，是不是消化时间太长了，你可以试试直接吹打成几个细胞一起的小球，再培养。用酶消化的话，我用过accutase消化10min再培养也能成球的，还有楼上说的接种密度也很重要的