求解神经球消化后无法成球

chinagdweiwei

神经干细胞聚集成球状后，消化成单细胞悬液，培养了一周，仍然是单个细胞是生长，未形成集落。神经干细胞不是可以传代的吗？

amosummer

那要确定你之前是不是真的干细胞球了。如果是的，一般来说是可以成球的。不过也要注意传代后是否培养条件有变化，才导致不成球的。先把这些问题搞清楚了，再看是不是其他方面的问题。

angelyannan

同意楼上的说法，接种密度是不是太低了？

jfy505

神经干细胞球一般是能传代的，是不是消化时间太长了，你可以试试直接吹打成几个细胞一起的小球，再培养。用酶消化的话，我用过accutase消化10min再培养也能成球的，还有楼上说的接种密度也很重要的

conanthird

同样的问题，不过是别的细胞系。我是用的accutase消化的四个细胞球，然后接种到六孔板的。可能接种的细胞密度太低的缘故吧。

cyumin123

楼主说一下你的传代方法，大家可以讨论一下的。传代的话注意细胞的消化时间和接种密度，我觉得你是不是消化时间过长了。

chinagdweiwei

谢谢) g8 }" v( S7 H$ i9 K) E
我是先离心去掉上清，加入胰酶，吹打后在培养箱中孵育3-4min ，然后再离心，去胰酶----加入培养基吹打后种板。
% k, I  L! ~1 u0 E5 w至于细胞密度，我也考虑过是因为种板的细胞密度过小，导致细胞无法成球，甚至死亡。可是反复试过几次，都还是失败。
0 l' d3 g/ I5 J) N

ycjzyh

我想问一下你这个细胞球是怎么挑出来的呢？

bin

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* s3 t" B: E2 C4 O: n/ f7 C+ `3 ~! o% C$ h' o( B% w+ w
细胞球传代也要用酶消化吗？仅仅靠吹打不能吹开吗？

jfy505

回复 bin 的帖子
, s( I2 i" S* w5 }! M6 J
  c9 w6 {- ]: b+ y直接吹打也能成球的，不过要控制好吹打力度跟次数，最好不要有气泡产生。仅仅靠吹打和用accutase酶消化，我都试过，都能成球。两种方法各有利弊吧，单纯机械吹打的，培养后发现细胞碎片比较多，而酶消化的 培养后观察瓶底背景比较干净，但要多次离心，细胞损失比较大一点。