求助取兔骨髓间充质干细胞！

ZPFA

取了三次兔的骨髓间充值干细胞都没成功。最近一次用40多天的兔子，全骨髓贴壁培养，培养液直接冲洗骨髓，不离心，直接放在培养瓶培养。里面有许多红色絮状物和浮在上面的油脂。培养时一直浑浊。结果只出现一些成团圆形细胞。请问哪里有问题？

蓝O海

你没说清楚你培养了多久，全骨髓培养需要换液2-3次后才能出现贴壁的msc，至少的7天以后吧.至于那些油脂，等贴壁的msc出现后可以将上清弃掉。更换新的培养基。如果培养瓶子也脏的话就换个瓶子吧。祝实验顺利！

pink1198

我也是全骨髓贴壁法。取骨冲洗骨髓法我做了几次也失败，容易污染。所以我改用骨髓抽取法。如下：取6-8周龄兔，体重1.0kg左右，麻醉后剪去双侧髂嵴术区皮毛，放入含500ml75%酒精桶中皮肤消毒。碘酊再次消毒髂部皮肤，用含500U/ml肝素生理盐水1ml肝素盐水的5ml注射器及针头抽取髂棘部骨髓4-5ml,移入含20mlDMEM的50ml离心管内，放入冰盒转移至培养房。吹打均匀后离心，1500rpm5分钟，PBS再洗一遍，离心。弃掉上清。加入适量培养基含10%FBS及双抗，接种于T-25培养瓶。48小时第一次半量换液。隔天全量换。以后3天换。开始都是一片红色血性液体，第二次换液后才可以看到MSC。大概10-14天左右培养瓶见不均匀分布的细胞克隆群，有的大片地方没有细胞，有的细胞高度密集，这时可以1:1传代。