求助：神经干细胞分化能力鉴定

angelyannan

我最近想做小鼠胚胎神经干细胞分化能力的实验，看过一些文献，发现大部分是做贴壁后在含有胎牛血清的的分化培养基中诱导分化培养。然后用不同的神经细胞标记物来标记以检测分化率。我有两个疑问请大家帮助解答：
% z% \; j8 a% ]6 y0 ~# T7 m1、分化培养基中FBS的浓度各不相同，有用1％、2％、10％，这些不同的浓度有怎样的一个选择依据呢？' }( w4 A% K# u5 [4 J
2、神经干细胞、神经前体细胞和不同分化时期的神经元以及胶质细胞都有两个以上的标记物，我发现不同的文章中使用的标记物也各不相同。那么是因为不同的研究目的而使用不同的标记物么？在这些文章中我并没有发现对这些标记物选择的特殊说明。5 q1 F3 @/ Z" ^7 O
希望大家能帮忙提供相关的选择依据和文献支持，谢谢！

流浪的波斯猫

首先关于FBS浓度的回答：不同浓度的血清对细胞诱导分化的时间和细胞分化的比例是不同的，你要根据自己的实验目的进行这几个浓度的比较，看一下分化相同时间内，几种不同浓度的血清对分化细胞出现的比例以及复杂程度来决定自己的实验方案；很可能高浓度的血清在第二天的时候细胞就已经发生完全的分化，而低浓度的血清在一周内都没有明显的变化，呵呵，可能有点夸张，反正就是根据自己的实验目的比较不同血清浓度之后再决定自己使用何种分化方案；! X1 ]7 Y: B% @' P% U( z9 f
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第二个问题：是根据自己的研究目的来选择相对应的标记物，目前为止没有任何相当专一特异性的表面标记蛋白能够说明该细胞是神经干细胞还是神经前体细胞，大家都是根据各自实验的目的采用不同的标记来实现对自己实验的验证和支持！

angelyannan

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; w4 D" _4 c9 ^% P! U+ |
9 ?" }5 `7 \, Q/ J5 L有道理，谢谢啦！

流浪的波斯猫

呵呵

angelyannan

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5 \. S- G. H8 q/ g
: [/ L0 T, U0 z2 L你好，最近的实验中出现了一个问题，向您请教一下。我采用的是1％FBS，添加于去除生长因子的培养基中，来诱导分化，发现采用的神经元标记marker β-3-tubulin的比率较一般文献中低，大概只有6％，请问有什么方法提高这一比率呢？在不添加其他因子的前提下~谢谢！

流浪的波斯猫

回复 angelyannan 的帖子0 O/ L, D- I/ D6 C
% G% J) K, l2 W1 M7 w- v
呵呵，我想知道一般文献中所提到的分化成神经元细胞的比例是多少呢？" q9 j- n; i: T% a2 l$ A
你更换成含1%FBS的诱导分化培养基时细胞的比例是多少呢？你诱导分化的时间是多长呢？这些都没有确定很难说应该怎么提高分化细胞所占的比例的* Q, _) B0 O5 |4 N, u+ p0 @9 L, P

angelyannan

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2 f- C+ v9 \7 J5 `2 S/ G; {
  p/ y" R$ Z, J8 j. }; R$ Z4 a7 M我看到的大部分使用类似方法的分化成神经元的比率都是百分之十几以上的，也有三十几的。物品诱导分化的时间是7days。

kudy

1%FBS 诱导比例比较低 感觉文献报道不一定正确  这个每个人做都不一样  有的NSC球 没洗干净 可能存有bfgf或者egf之类的营养因子存在  对实验纯在假阳性结果 所以 还是根据自己的实验为准 实事求是

流浪的波斯猫

回复 angelyannan 的帖子- I7 [& T) G! g- o  B* }7 R

- c( y3 v; J3 L- \7 _* j提高分化细胞时细胞的密度，分化七天时间应该是完全可以满足的  至于比例主要涉及到细胞的取样差异 以及细胞来源差异 尤其是小鼠胚胎的神经干细胞 最好还是调整以及把握以下正确的取材时间
  D7 R3 l4 H% T6 r5 b/ Y有时候可能过了最佳取材时间结果就会有很大的差异的

angelyannan

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3 \- I" W9 P' `7 @5 J" ?/ u. }! y0 ^. A! {: ^( B8 t( a& P
谢谢哈~我个人也觉得细胞密度影响很大，我现在的接种密度是1×10*4cells/cm2，所以我想试着将细胞密度翻一倍试试。另外我的取材是胚胎小鼠16~18天的海马~是不是胚胎的天数也最好严格限制一下比较好~