MEF是先铺后灭活好还是先灭活后铺好？

tigerfish

常用的程序是灭活后冻存，使用的时候再解冻铺出来

ldy689689

我用的是后者，但是有一次我没有处理冷冻过的了，就现用现处理了几板，结果与冷冻的效果一样。

liuyunhui2004

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" x( b) A! f$ U
, a0 m! i  u* f9 [& g. I+ `8 I, b) C和我们用的方法一样

dongxin

我们采用后者，效果还是很不错的！

christophe

回复 yangpan521 的帖子( Y/ [1 ~2 s9 M9 u& d
' a, b0 [+ X! ?+ r4 o
区别不大，基本上死的很少。

dilal

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' w: ~4 x, p% P$ ?( n* W  h( T
$ E* o, s. @3 |+ D9 z/ i) t谢谢，不错的方法，借鉴一下

懵懂干细胞

我一般是在P2-P3代把细胞用丝裂霉素处理之后再冻存，然后再复苏出来做饲养层，
& {  s" z0 W; [  ^考虑周到一点的话，可以在P1-P2代就不用丝裂霉素处理冻存一批，等要用的时候可以6 \1 {" `( c+ l9 W! D7 _
复苏出来，传一代再现处理现用，这样就可以有足够的MEF细胞用，也不会纠结冻存前处理还是冻存后处理。
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yangpan521

回复 christophe 的帖子7 z* s- b7 n2 T: g! l) C( A2 c& ]7 v& k
6 r2 V! T5 }' F5 U7 U+ c7 O) l( ^
有没有比较过解冻的饲养层与现铺的区别大吗，解冻的有没有漂很多死细胞

dilal

回复 yangpan521 的帖子
1 t4 m9 h( |/ H) F: r4 W. W" L2 k9 s2 ^& O3 y1 {$ H3 p
我师兄也说是要现用现处理，说是冻存以后细胞状态会不好，但是查看了很多干细胞培养手册都是处理后再铺板，多余细胞冻存。- X% E; s4 t( L8 J! |
个人觉得现用现处理的话工作量太大了，做一个原代多次传代以后是可以得到大量的细胞的，远远超过了ESC培养所需要的细胞量。多余的细胞不冻存的话实在是浪费，孕鼠死的都有点怨。另外，MEF用于feeder以第三代细胞最好，最好不要超过6代，如果现用现处理的话，缩短了原代使用的期限。

lemma710

我也是用后一种方法的，灭活以后，计数冻起来，要用的时候再复苏。/ o- ]+ E4 r+ f* T- b' b) w$ B5 H
但是你要提前试一下你的培养皿或者培养瓶用多少数量处理过的MEF密度比较合适，以后就可以一直用这个密度了。