求助：胚胎干细胞分化问题

hswu01

各位，想问一下，我养的JM8的干细胞在复苏后第一天状态还不错，隔一天就有分化迹象，培养基里加了lif，感觉就是细胞密度稍微密一点时就开始分化，滋养层用的是MAF，不知道怎么回事，哪位大侠给指点一下应该怎么调整一下？

zpzp0312

MAF？
  h: j. z1 G/ B- R$ H; Eadult？

hswu01

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* @1 L2 t$ N! {1 L4 v7 J) V: w, f! ~: {+ c5 W
不好意思 打错了 滋养层用的MEF

yeya

多传几代试试看……从六孔板到6cm扩的时候也多传几代……还有啊，MEF是几代的啊，不要太老的……

hswu01

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% |- B! N" Z' L- A; h- q7 {& o. }$ K% V% d
恩 MEF代数有点高，是第六代的

zpzp0312

我觉得应该是细胞自身问题
- e) j$ ]0 ?5 L  H饲养层即是第六代，只要立体感较强，对ES细胞培养来说不会产生影响* b# P1 N% E0 [
建议换细胞
7 ~( {3 Y! a8 R6 U# H: Y或者低密度接种看一看是不是ES细胞的问题，或者适当提高饲养层密度试一试

chliu

建议铺稀一点试一下，如果不行，可能是细胞本身不太好，有分化倾向

hswu01

我们之前做过一次对照，就是按照正常密度和1/2正常密度铺下的滋养层，感觉效果都差不多。可能就如zpzp0312 说的是细胞本身的问题，谢谢各位的建议！

song1978

6代的MEF我觉得应该是不好用了。/ a( ~# z. {+ d# G
通常我们只用4代以内的...

hswu01

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: Y6 i* L  z: m4 N& Z+ Z0 z6 ^, w, F" ^2 m
对 比较好的MEF代数一般是3-5代，但是我培养基里加了1000x的lif，还是出现分化