小鼠ES细胞核型分析

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以前做过很多培养细胞的核型分析，不过都不是干细胞的，个人感觉培养细胞核型分析大同小异。) k: ~1 O+ L# u2 N# Q) q+ L6 V
细胞培养在什么基质上不是主要问题，你可以培养在载玻片上，也可以培养在培养瓶中或者培养板中，核型分析时最重要的是要获得足量的处于分裂中期的细胞。、' J$ N# Y% A- _0 g
给你个步骤：、
+ [: `3 J1 r7 x; T1、细胞培养（用你最常用的培养系统和培养器皿）
. a" P& b  L  |6 ~- Z2、秋水仙素处理（处理的时间和处理浓度可以参考你查阅的文献）
) t  X: S& I3 V. U+ t: v( I3、收集细胞，我以前培养的是体细胞，所以一般是胰蛋白酶消化，离心收集
9 o& S% z; q/ N4、培养细最适培养温度下，KCl低渗处理30min（浓度参考一般的核型分析的浓度）4 P" a( i- N( }! f
5、离心收集细胞# l% q: S7 ]0 S5 X2 ?! S: Q
6、固定细胞（固定剂我采用的卡诺氏固定剂，固定时间10分钟即可），固定剂加入后记得将轻轻细胞吹散，力量不宜过大，不然细胞可能被吹破。
! j6 _8 T3 L; D' m, l7、离心收集细胞；% U0 N, }$ t4 s- R, Q
8、1mL固定剂悬浮细胞；
$ o1 X( Q  k* L& |9、滴片（也称为摔片）滴片的过程你可以查阅细胞生物学相关的书籍所陈述的方法，关键点：1）、滴片时所用的载玻片要充分洁净 2）、载玻片要充分预冷， 3）滴片时距离15cm以上；4）滴片后记得将载玻片样品面朝上，在竖直方向上震荡。; t) o0 r4 ?& }" m* {! p. i
10、将含有样品的在载玻片充分干燥；
* {) b3 w' C+ w* F4 j6 D  H  ]11、Gimsa染色，染色时间30min便可以
; v" i* X; J( Y, d' e12、流水冲洗1~2min、
0 r+ e( p" Y& h* w( }/ p2 Q. ?13、干燥后镜检即可
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补充：上面步骤中所列离心后收集细胞是将细胞悬液离心后，去上清，收集细胞沉淀。
3 B3 L: g" m9 {7 m* h1 m  K. I另外Gimsa染色时，染液一定要用滤纸过滤。

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干细胞的核型没有做过，不过正常体细胞核型分析时，不能老化，必须选择处于分裂增殖旺盛时的对数生长期来做，因为对数生长期的细胞增殖分裂比较旺盛，用秋水仙素处理，能获得较多的分裂相。如果你看的文献是针对于体细胞的，那么他这么说个人认为不合适。